מידול פגוציטוזיס מתווך משלים באמצעות תאי דם אדומים אופסוניים במבחנה

קחו לדוגמה תאי דם אדומים של כבשים (SRBCs) של IgM-אופסוניים עם נוגדני IgM הקשורים לאנטיגנים על פני התא.

הוסיפו סרום המכיל חלבוני משלים למעט C5.

קומפלקס C1 נקשר לנוגדנים והופך לפעיל.

C1 המופעל חותך את C4 ו-C2, ויוצר את C3 convertase, אשר לאחר מכן חותך את C3 ומפקיד את C3b על ה-SRBCs.

בלי C5, C3b מתדרדר ל-C3bi.

הוסיפו את ה-SRBCs לתרבות המאקרופאג'ים.

C3bi נקשר לקולטן המאקרופאג', ומפעיל את הפגוציטוזיס של SRBC.

הוסף תמיסה היפוטונית לליז והסרת SRBCs שאינו מופנם.

הוסף בופר ליזיס כדי לעבור את התאים ולשחרר המוגלובין של SRBC.

הכנס מגיב גילוי.

בנוכחות אוריאה, המוגלובין מזרז את חמצון הדיאמינופלואורן על ידי מי חמצן, ויוצר תוצר צבעוני.

מדדו את הספיגה של התוצר הצבעוני, שהיא פרופורציונלית ל-SRBCs שנפגעו.

בדיקה זו מדמה פגוציטוזיס של חיידקים מסומנים בנוגדנים באמצעות SRBCs אופסוניים לחיקוי מטרות חיידקיות.

לבדיקת אופסוניזציה, יש לדגור 2 פעמים 10 עד שמינית תאי דם אדומים של כבשה או SRBC עם 50 מיקרוליטר של אימונוגלובולין M או IgM נגד SRBC ארנבים למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, דגרו את ה-SRBCs האופסוניים עם 50 מיקרוליטר של סרום אנושי חסר C5 למשך 30 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי לקבע את שברי המשלים המעכבים C3b ו-C3b על SRBCים מצופים IgM.

לאחר מכן, שואף את המדיה והוסיף 100 מיקרוליטר של 1 כפול 10 לשבעת SRBCs א