היברידיזציה פלואורסצנטית במקום של חיידקי מעי בחתכי מעי בעכברים

התחילו בהוספת תמיסה המכילה חיידקי 16S rRNA ייחודיים ל-Fluorescence in situ hybridization (FISH) לשקף המכיל את חלקי המעי של העכבר שהתיישבו על ידי חיידקים.

הניחו כיסוי כיסוי כדי לפזר את הנוזל המכיל גלאים ולמנוע אידוי.

דגרו את המחסנית בתא לח בטמפרטורה מוגברת.

זה פורש את המבנה המשני של ה-RNA, ומקל על היברידיזציה של הגשוש עם רצפים משלימים ב-rRNA חיידקי 16S.

הסר את הכיסוי ודוגר את המחסנית בבופר שטיפה מחומם מראש כדי להסיר את הגשדים הלא קשורים.

לשטוף עם בופר פוספט לשמירה על pH פיזיולוגי.

מרח צבע נגד המכיל צבע ייחודי לריר וצבע גרעיני, ודגם.

צבעים אלו נקשרים באופן סלקטיבי לריר המעי ול-DNA של תאי חיידק ותאי מארח. שטפו את המחסנית עם בופר והתקינו את הכיסוי על הסלייד באמצעות מדיה להרכבה.

מתחת למיקרוסקופ קונפוקלי, ניתן לצפות בחיידקים מסומנים על ידי FISH, תאי מעיים ושכבת הריר בתוך החתכים.

צור מעגלים קרובים מאוד סביב כל חתך רקמה באמצעות חוסם נוזלים או עט PAP כדי להגביל את שטח ההתרחבות הנדרש לכיסוי בתמיסת ההיברידיזציה, ולמנוע מגע דיו עם החתך.

הכינו את תמיסת ההיברידיזציה והוספו 0.5 מיקרוגרם של גלאי לכל 50 מיקרוליטר של התמיסה שהשתמשו בה. הפיפט את הפתרון על החלקים בשקף. כיסו את החלק בכיסויי פלסטיק גמישים, כדי להבטיח שנפח הנוזל המשמש מכסה את כל החלק.

צרו תא לח עם קופסת קצה פיפטה עם מגבונים או מגבות נייר שהושרו בתמ