אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:04 דק׳ • January 30th, 2026
התחילו בתרבית של Legionella pneumophila, חיידק גראם שלילי פתוגני שמשחרר שלחיצות ממברנה חיצונית.
OMVs אלו נושאים ליפופוליסכרידים וחלבוני ממברנה התורמים לאלימות חיידקית.
צנטריפוגות את התרבית כדי לגרגר חיידקים שלמים.
אסוף שוב את הסופרנטנט המכיל OMVs וצנטריפוגה לחיידקים שנותרו בכדורים.
סנן את הסופרנטנט דרך ממברנה כדי להסיר את החיידקים שנותרו תוך שמירה על OMVs.
בצע סינון שני באמצעות ממברנה טרייה להסרת פסולת חיידקים.
אסוף את הסינון ללא חיידקים ובצע עליו אולטרה-צנטריפוגה כדי לפרוק את ה-OMVs.
להשליך את הסופרנאנט, להחזיר את הכדור לבופר, ולבצע אולטרה-צנטריפוגה שוב כדי להסיר חלבונים ופוליסכרידים קשורים באופן רופף.
הסר את הסופרנטנט ותשהה מחדש את ה-OMV המטוהרים בבופר.
הורד אליקו של ה-OMVs על לוחות אגר דם ו-BCYE אגר ודגם.
היעדר היווצרות מושבות מאשר את היעדר זיהום חיידקי.
אחסן את ה-OMV בטמפרטורה נמוכה לצורך מחקרי אינטראקציה בין מארח לפתוגן.
הוסף את התרבית הנוזלית שנותרה ל-90 מיליליטר של מדיום YEB טרי ודוגר את התרבית על שייקר מסתובב עד שהיא מגיעהל-OD 600 של 3.0 עד 3.5. צנטריפוגה את תרבית הנוזל ב-4,000 גרם למשך 20 דקות כדי לפרוק את החיידקים. לאחר מכן העבר את הסופרנטנט לצינורות צנטריפוגות טריים.
השליכו את הכדורים החיידקיים ובצנטריפוגה את הדגימות שוב לפני שחוזרים על שלב הצנטריפוגה. לאחר מכן, סנן את הסופרנטנט שנות
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים