אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:51 דק׳ • February 2nd, 2026
התחילו עם צלחת רב-בארות המכילה חרוזים סטריליים ובופר בכל באר.
הוסף נמטודת C. elegans לכל באר כדי לבודד את קהילת החיידקים שלה.
באמצעות הומוגניזר, משבש את הנמטודות באופן מכני כדי לשחרר את החיידקים אל הבופר.
צנטריפוגה להפרדת שאריות התא ואיסוף הסופרנטנט המכיל את החיידקים.
הפלטה את תמיסת החיידקים המדוללת על פלטות אגר סלקטיביות של חומרים מזינים עם הרכבים משתנים כדי לתמוך בצמיחת סוגי חיידקים מגוונים.
דגרו את הלוחות כדי לאפשר לחיידקים להתרבות וליצור מושבות נראות לעין.
באמצעות לולאה סטרילית, בחר מושבה מבודדת אחת ומרח אותה על צלחת טרייה מאותו מדיום.
דגרו את הלוחות כדי לאפשר צמיחה של מושבות חיידקים טהורים.
החסן כל מושבה טהורה לתוך הנוזל המתאים ודגם.
חיידקים אלו גדלים לתרביות טהורות, שכל אחת מהן מייצגת מין חיידקי המזוהה באופן טבעי עם C. elegans.
כדי לבודד את החיידקים, יש להכין צלחת עם 96 בארות עם כשלושה חרוזים סטריליים בקוטר 1 מילימטר, 20 מיקרוליטר של בופר M9 לכל באר, ופיפטה של נמטודה אחת שטופה לכל באר עם כמה שפחות נוזל. שברו את הנמטודות כפי שהודגמו קודם לכן באמצעות הומוגניזר חרוזים, ולאחר מכן בצנטריפוגה קצרה של הפלטה כדי להעביר את הנוזל לתחתית. לאחר שסיימו, אסוף את המתלה ומדלל אותו בקצב אחד עד עשר.
לוחות עד 100 מיקרוליטר של המתלה המדולל על לוחות אגר בקוטר 9 סנטימטר. לאחר מכן דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 15 עד 20 מעלות צלזיוס למשך 24 עד 48 שעות. כדי לקבל את תרבית החיידקים הטהורה, בחרו מושבה אחת מהצלחת המוקפת באמצעות לולאה סטרילית או קיסם ומרחו אותה על צלחת אגר חדשה המכילה את אותו מדיום אגר ששימש במהלך הטיהור. ודא שאתה משתמש רק בשליש מהצלחת.
לאחר מכן, סטריליזציה של לולאה רב-פעמית או השתמשו בלולאה סטרילית חדשה וגררו אותה דרך הרצף הראשון כדי ליצור פס שני על שליש נוסף של לוח הדגימה. חזור על זה על ידי גרירת לולאה דרך הרצף השני ויצירת הרצף השלישי כדי להשיג את צמיחת המושבה היחידה.
דגרו את הפלטה באותם תנאי גדילה המשמשים לבידוד, ואם יש צורך, חזרו על שלב הטיהור. גדלו את המושבות הטהורות במדיום נוזלי באותם טמפרטורה ותנאי גדילה.