בידוד תאי אפיתל בשלפוחית העכבר המכילים קהילות חיידקיות תוך-תאיות

התחילו בתאי אפיתל בשלפוחית השתן שנגרדו משלפוחית עכבר שנדבקה ב-E. coli אורופתוגנית מסומנת פלואורסצנטית.

במהלך ההדבקה, חיידקים אלו פולשים לתאי אפיתל ויוצרים קהילות חיידקים תוך-תאיות, או IBCs—מבנים דמויי ביופילם שמגנים עליהם מפני הגנות חיסוניות של המארח.

תחת מיקרוסקופ ניתוח, יש לזהות את IBCs כאגרגטים פלואורסצנטיים גדולים הכלואים בתוך תאים אפיתליים בודדים.

הרכיבו מערכת מיקרופיפטינג בפה באמצעות נימי זכוכית נמשכים המחוברים לפיפטה שואפת כדי לבודד תאי אפיתל יחידים המכילים IBC.

טבלו לזמן קצר את קצה הנימים ב-PBS כדי להפחית את קליטת הנוזל המונע על ידי נימים.

מקם את הנימים ליד תא אפיתל פלואורסצנטי שנבחר והפעל יניקה עדינה כדי למשוך תא יחיד המכיל IBC, תוך הימנעות מתאים לא נגועים וחיידקים חוץ-תאיים.

הוצא את התא לצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי בלחץ חיובי קל, תוך שמירה על חיוניות חיידקית.

שיטה זו מאפשרת בידוד תאי אפיתל המכילים IBC לניתוח תא יחיד.

כאשר כל התאים נגרעו, הכניסו את הקצה הלא מושך של נימי זכוכית נמשכים לתוך פקק הגומי של צינור השפירה, וחברו היטב את קצה הפיפטה הצר של 1 מיליליטר לקצה הפתוח השני של הצינור.

הכניסו היטב את הקצה הצר של פיפטת 2 מיליליטר לקצה הפתוח והרחב של קצה הפיפטה בנפח 1 מיליליטר ומניחים את מתלה התא השרוט תחת מיקרוסקופ ניתוח. באמצעות הגדלה של 20 עד 40x, זהה את ה-IBC כאגרגטים פלואורסצנטיים