זיהום פה של דרוזופילה מלנגסטר עם חיידקים פתוגניים

קחו בקבוקון עם מכסה שמחזיק אגר חומרים מזינים עם נייר פילטר.

מרח תלייה של חיידקים פתוגניים על נייר הסינון.

הכניסו זבוב Drosophila melanogaster רעב לתוך הבקבוקון, ואז הניחו את המכסה. דגרו כדי לאפשר האכלה ולהבטיח בליעת חיידקים.

החיידקים שנבלעו נכנסים למעי וחודרים לממברנה המגנה שמציפה את הלומן.

החיידקים נדבקים לאפיתל שמתחת, משחררים רעלים המקדמים נזק ופלישה לאפיתל, ומתיישבים ברקמות הפנימיות.

טבלו את הזבוב באלכוהול כדי להסיר חיידקים הקשורים למשטח, ואז שטפו כדי להסיר אלכוהול.

הוסיפו בופר והומוגני את הזבוב כדי לשחרר את התכולה הפנימית של החיידקים.

לבצע דילול סדרתי של ההומוגנט במיקרופלטה. לאחר מכן, יש לצלוח את הדילול על אגר החומרים המזינים ולדגור כדי לאפשר יצירת מושבה.

ספרו את המושבות כדי לקבוע את מספר התאים החיידקיים החיים שנגרמו מזיהום פה בזבוב.

שעתיים עד ארבע שעות לפני הזיהום בפה, העבר את הזבובים לבקבוקי אגר סטנדרטיים שאינם מכילים מזון. בינתיים, לכל זבוב, הכינו בקבוקון זיהום.

קודם כל, טען את מכסה צינור דגימה בנפח 7 מיליליטר ב-500 מיקרוליטר של אגר סוכר סטנדרטי ותן לו להתקשות. לאחר מכן, תכניס דיסק נייר פילטר לאגר. לאחר מכן פיפטה של 100 מיקרוליטר של תרבית חיידקים ישירות על דיסק הסינון. לבקרה, השתמשו במי סוכרוז 5%.

לאחר תקופת הרעב, העבר זבובים בודדים לצינורות המוכנים. לאחר דגירה של הזבובים במשך 18 עד 24 שעות, יש לחטא אותם על פני השטח. טען פרטים לצינור המכיל 100 מיקרוליטר של 70% אתנול.

לאחר 20 עד 30 שניות, הסר את האתנול והחליפו ב-100 מיקרוליטר של מים מזוקקים משולשים. אחרי עוד 20 עד 30 שניות, הוציאו את המים. ואז מוסיפים 100 מיקרוליטר של PBS והורמוגנים את הזבוב.

העבר את ההומוגנט לשורה העליונה של לוח עם 96 בארות והוסיף 90 מיקרוליטר של 1x PBS לכל באר מתחת. לאחר מכן, באמצעות אליקווטים של 10 מיקרוליטר, מדללים את הדגימה באופן סדרתי כדי להבחין בטווח של ערכי CFU. לאחר מכן, ציפוי את הדילול הסדרתי על צלחת אגר נוטריינט LB בטיפות של 5 מיקרוליטר.

מקם את הטיפות כך שהן ממוקמות בדיסקרטיות על הצלחת. אחר כך דגר את הצלחת למשך הלילה. למחרת, חשב את מספר ה-CFU מהדילול שמייצר 10 עד 60 מושבות ברורות.