הדמיית ביולומינסציה של זיהומים חיידקיים בעכברים

קחו עכבר מורדם עם חתכי עור שנדבקו בחיידק פתוגני.

החיידק מהונדס גנטית לשאת פלסמיד המכיל את מערכת הדיווח luxABCDE , המאפשרת ביולומינציה אוטונומית.

הנח את העכבר במצב שכיבה על פלטפורמת ההדמיה לביולומינסנציה.

באתר ההדבקה, הגנים luxA וה-luxB של החיידק מקודדים את אנזים הלוציפראז, בעוד שגנים של luxCDE מקודדים אנזימים המסנתזים אלדהידות שומן ארוכות שרשרת, המשמשים כסובסטרט ללוסיפראז.

בנוכחות חמצן, לוסיפראז מזרז את החמצון של הקופקטור שלו, מונונוקלאוטיד פלבין מופחת, שמגיב לאחר מכן עם האלדהיד השומני ארוך השרשרת ומייצר אור כחול-ירוק.

ביולומינציה זו מצביעה על נוכחות חיידקים פעילים מטבולית באתר ההדבקה.

באמצעות מערכת ההדמיה, יש לצלם את אתר הזיהום ולכמת את עוצמת אות הביולומינצנציה.

להדמיה ב-invivo של פצעים נגועים, יש לעקוב אחר פרוטוקולי בידוד ברמת בטיחות ביולוגית ברמה שתיים להובלת העכברים אל וממכשיר ההדמיה, והנח את העכבר המורדם במצב שכיבה בתוך תא ההדמיה.

בתוכנת ההדמיה, הגדר את זמן החשיפה, הערכה, ה-f-stop ושדה הראייה כמתאימים לניסוי.

לאחר מכן, צור אזור עניין באתר הפצע ומדד את השטף הממוצע שזוהה בפוטונים בשנייה.

כדי למדוד את הרקע, צור אזור עניין מעל שטח אקראי בפלטפורמת ההדמיה והחסר את מספר הפוטונים ברקע בשנייה.