הדמיה חיה של מוות תאי מקרופאג במהלך זיהום מיקובקטריאלי בעוברי דגי זברה

התחל עם עוברים טרנסגניים של דגי זברה המבטאים מקרופאגים מסומנים פלואורסצנטית, המותקנים באגרוז עם התכה נמוכה בצלחת הדמיה.

עוברים אלו נדבקים ב-Mycobacterium marinum המסומן פלואורסצנטית באמצעות הזרקה תוך-שרירית לתוך המוח התיכון, וכך מתחילה תגובה חיסונית מקומית.

כסו את האגרוז המוצק במדיה עוברית המכילה תרופות הרדמה לשמירת ההרדמה ומעכבי כימיה לדיכוי פיגמנטציה, תוך שמירה על בהירות אופטית להדמיה.

הנח את הצלחת בתא הסביבתי של מיקרוסקופ קונפוקלי ברזולוציה גבוהה.

באמצעות תאורת שדה בהיר, אתר את האזור הנגוע.

הפעל את ערוצי הלייזר הפלואורסצנטיים, הגדר את מיקום ההתחלה והסוף של Z-stack, והתחל הדמיית טיים-לאפס.

תדמיינו את המקרופאג הנגוע, המלא בחיידקים פלואורסצנטיים, כשהוא הופך למעוגל ובלתי נייד.

זה מעיד על התפרקות ציטוסקלטלית ותחילת מוות תאי ליז.

עם הזמן, המקרופאגים מתנפחים ומתפוצצים, משחררים תכולת ציטופלזמה וחיידקים מופנמים לרקמה הסובבת, סימן היכר למוות תאי ליז דלקתי.

לאחר שהאגרוז התקשה לחלוטין, כסו את האגרוז בשכבת מים של ביצים. לאחר הקמת תא הסביבה, מניחים את הצלחת עם תחתית זכוכית בגודל 35 מ"מ עם דג הזברה בתא הסביבתי. פתח את דיודת 405, ארגון ב-20% הספק, ולייזר DPSS 561 ננומטר. הגדר את עוצמת הלייזר המתאימה בהגדרות ספקטרום.

בחר במצב רכישה "XYZ" "סריקה רציפה", והגדר את פורמט התמונות ל"512 על 512 פיקסלים". עברו למצב "Live Data Mode", כוונו את מיקום דג הזברה הראשון, וסמנו את מיקום Z "התחל" ו "סיום". חזור על התהליך הזה עבור כל אחד מהעוברים שנותרו. הוסף "הפסקה" בסוף התוכנית. הגדר את הלולאה והמחזור של התוכנית, ושמור את הקובץ.