JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:45 דק' • February 2nd, 2026
התחילו עם גורי עכברים יילודים בגיל תואמים.
הרימו בעדינות את העור מאחורי צוואר כל גור. הזרקו תת-עורית לגור אחד תכשיל בריכוז נמוך של חיידקים פתוגניים ולגור אחר בתרסיס בריכוז גבוה.
חיידקים אלו מבטאים אופרון ביולומינצנטי שמייצר את אנזים הלוציפראז ואת המצע שלו, ומאפשר פליטת אור אוטונומית.
קפסולת פוליסכרידים מגנה מקיפה את החיידקים ומסתירה את האנטיגנים על פני השטח, ומונעת זיהוי על ידי תאי החיסון של הגורים.
החזירו את הגורים לאמם הביולוגית לטיפול לאחר הלידה.
התרבות חיידקים באתר ההזרקה גורמת לדלקת ולהגברת חדירות כלי הדם, ומאפשרת כניסת חיידקים לזרם הדם והתפשטות מערכתית.
הניחו את הגורים המורדמים תחת מערכת הדמיה זוהרת.
לוציפראז מחמצן את המצע כדי לייצר אור נראה, ומאפשר חזון של חיידקים בתוך הגורים.
צלם תמונות לאורך זמן כדי להשוות את צמיחת החיידקים וההתפשטות בגורים מחוסנים בריכוזי חיידקים גבוהים ונמוכים.
התחילו בהנחת גורים תואמים גיל לקבוצות שגר במינון גבוה או נמוך בתוך ארון בטיחות ביולוגית ברמה שתיים. ביום השלישי או הרביעי לאחר הלידה, רשמו את משקלי כל הגורים לפני החיסון.
טעינו את מזרקי האינסולין עם PBS או במינון גבוה או נמוך של E. חיסון Coli Lux בארון הבטיחות הביולוגית והניח את המזרקים הטעונים על קרח.
הנח את הניאונאט להזרקה על משטח נקי בתוך ארון הבטיחות הביולוגית והרים את העור בקצה הצוואר כאילו כדי לאחוז בזירת הגור. הכנס את הקצה הבולט מתחת לעור, במרווח שנוצר בין העור לשריר. כאשר המחט מורגשת מתחת לעור, הזריק 50 מיקרוליטר של החיסון תוך כדי שחרור החלק הלחוץ של העור כדי למנוע זרימה חוזרת. לאחר מכן, הסר את המחט לאט ובזהירות.
כאשר כל הגורים הוזרקו באותו אופן, החזירו את הגורים לאמהות שלהם. מיד לאחר ההזרקה ובנקודות הניסוי המתאימות לאחר מכן, מניחים את הכלוב עם E. עכברים ניאונטליים נגועים בקולי לוקס ומחברים לתוך קפוצ'ון זרימה למינרי ברמת בטיחות ביולוגית שתיים ופותחים את התוכנה במחשב מיקרו-CT. לאחר אתחול המערכת והמתנה לטמפרטורת השלב להינעל על 37 מעלות צלזיוס וטמפרטורת ה-CCD ל-מינוס 90 מעלות צלזיוס, מניחים עד ארבעה גורים מורדמים על תיבת ההדמיה בתא ההדמיה במצב שכיבה.
סגור את דלת תא ההדמיה ובחר באפשרות ההדמיה הזוהרת. בחר 'פתח את המסנן' ו'הבא', והגדר את מסנן הגירוי לחסימה ואת מסנן הפליטה לפתוח. בחר 500, 520, 560, 580, 600 ו-620 ננומטר.
לאחר מכן, דמיינו את הגורים לפני החזרתם לכלוב עם האם, עם מעקב עד להחלמה מההרדמה.