זיהוי במקום של חיידקים בחתכי רקמת החניכיים של העכבר

קחו חתך חניכיים של עכבר שנדבק בחיידקים פתוגניים, מטופל מראש כדי לגשת ל-DNA חיידקי.

הפעילו בופר עם גלאי DNA מסומן בדיגוקסיגנין המכוון ל-DNA חיידקי.

הניחו כיסוי ואטום כדי למנוע התייבשות בדגימה.

הכנסת חום לדנטטורציה של ה-DNA, ואז דגירה בתנאים חמים ולחות כדי לאפשר היברידיזציה של פרוב.

קרר את המחסנית והסר את הכיסוי, ושטוף מספר פעמים עם בופר כדי להסיר את הגלאים הלא קשורים.

הוסף תמיסת חסימה למניעת קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

דגרו עם נוגדנים אנזימיים צמודים שנקשרים לדיגוקסיגנין.

שטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

הוסף מעכב כדי לנטרל את האנזים האנדוגני באופן סלקטיבי.

מרח סובסטרט שמגיב עם האנזים כדי ליצור משקע צבעוני.

שטוף במים כדי להסיר את המצע העודף.

הוסיפו צבע כדי לצבוע את הגרעינים.

שטוף כדי להסיר צבע עודף.

ייבשו באתנול וטפלו בקסילן כדי להגדיל את שקיפות הרקמות.

תרכיב על החלק.

מתחת למיקרוסקופ, הצג את החיידקים בתוך החתך.

התחל את ה-in situ על ידי הטבלת השקופיות ב-2x SSC למשך 20 דקות. בינתיים, דילל את הגשוש המסומן ל-1 ננוגרם למיקרוליטר במאגר היברידיזציה. לבקרה שלילית, השתמש בריכוז פי 10 של גלאי לא מסומן. לאחר מכן, דטרנציה של הגשושים על ידי חימום ב-90 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, ולאחר מכן קירור מהיר על הקרח.

לאחר מכן, יש להחיל את אותו נפח דילול הפרוב על כל שקופית כמו פרוטינאז K. לאחר מכן, כסו בזהירות את החלקים עם