JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:29 דק' • January 30th, 2026
קחו עובר דג זברה שנדבק ב-Mycobacterium abscessus, חיידק פתוגני שמכוון למערכת העצבים המרכזית ויוצר מורסות המכילים חיידקים ותאי חיסון מארחים.
דגרו את העובר על קרח כדי לקבע אותו, ואז חשפו אותו למנת יתר של הרדמה כדי לעצור פעילות לבבית ועצבית, מה שמוביל למוות.
רחצו את העובר כדי להסיר שאריות הרדמה.
הוסיפו תמיסת אבקה כדי להפר את הממברנות התאיות וללפרק את העובר.
חותכים את הליזאט דרך מחט כדי להומוגן את הרקמה ולשחרר את החיידקים.
צנטריפוגה, זרוק את הסופרנאנט, והחזיר את הכדור לתמיסת סורפקטנט כדי למנוע הצטברות חיידקים.
מדלל באופן סדרתי את השעון החיידקי והפזר אותו על לוחות אגר.
המדיום מווסף באנטיביוטיקה לעיכוב גדילת מיקרובים אחרים, בעוד שתאי המיקרובקטריום המהונדסים לעמידות לאנטיביוטיקה מתרבים.
דגירה לקידום יצירת מושבה, מה שמאפשר לכימות את עומס החיידקים בעובר.
כדי למנות יחידות יוצרות מושבות או CFU בנקודת הזמן הרצויה, לאסוף חמישה עוברים לכל מצב זיהום ולהעביר כל עובר לצינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר. הקפיאו את העוברים על ידי דגירה על קרח למשך 10 דקות. לאחר הרדמת העוברים ב-300 עד 500 מיליגרם לליטר טריקאין, השתמשו במים סטריליים כדי לשטוף את העוברים פעמיים בצינור חדש.
לאחר מכן, לאחר הסרת מים ב-2% טריטון X-100 ב-1 X PBS לכל עובר, יש להשתמש במחט 26 גייג' להומוגניזציה של הרקמה לפירוק מלא.
לאחר צנטריפוגה של המתלה, השתמש ב-1 PBST כדי להחזיר את הכדור. לאחר מכן, דילול סדרתי של ההומוגנטים ב-Middlebrook 7H10OADC בתוספת BBL MGIT PANTA.
דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס במשך 4 ימים לפני ספירת המושבות.