אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:19 דק׳ • February 2nd, 2026
התחילו בתרבית של זן Aeromonas , פתוגן חיידקי שגדל במדיום עשיר בחומרים מזינים.
מדדו את הצפיפות האופטית של התרבית והתאימו את ריכוז החיידקים כדי להבטיח עומס זיהום עקבי.
הצלח את התרבית על מדיום גידול נמטודות או אגר NGM ודגור אותו ליצירת שכבת חיידקים אחידה.
הכינו זחלים מסונכרנים התפתחותית של C. elegans - נמטודה חיידקית המנוהלת על מדיום מועשר.
העבר את הזחלים לשכבת החיידקים ודגר כדי לאפשר בליעת Aeromonas דרך הפה ולאפשר התיישבות במעיים.
בתוך המארח, החיידקים מתרבים ומשחררים ציטוטוקסינים הפוגעים בתאי האפיתל במעי ומובילים לתמותה.
העבר את הנמטודות ששרדו לפלטות חיידקיות טריות וסופר מדי יום את מספר התולעים החיים, המתות והלא מגיבות עד שהתולעת האחרונה מתה.
לבסוף, ליצור עקומת הישרדות להערכת עמידות המאכסן לאורך זמן.
ראשית, בחרו מושבה אחת מכל אחת מארבעת זני ה-Aeromonas ומגדלים אותם בהתאם לפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן, מדדו את ספיגתה-OD 600 של ציר החיידקים והתאימו אותה עד שהספיגה שווה ל-2.0.
לאחר מכן תמצא ותפזר 30 מיקרוליטר של ציר חיידקים מכל זן לפלטות NGM.
בחר והעבר באקראי את תולעי L4 שהוכנו מראש ללוחות ה-NGM עם זני Aeromonas. לאחר מכן, דגרו את הלוחות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס עד שהבדיקה תושלם.
כל יום מעבירים את כל התולעים החיות לפלטת NGM חדשה עם חיידקים. ספרו את מספר התולעים החיים, המתים והחיישנים כל יום עד שהתולעת האחרונה מתה.