Name: Biofilm microtiter תבשיל גיבוש Assay (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-30T18:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 57 s
Description: למדו שיטה מהירה לניטוץ ביופילם מוקדם בחיידקים ובפטריות באמצעות צביעת קריסטל ויולט בלוח מיקרוטיטר 96-באר. שיטה זו מאפשרת ניתוח איכותני וכמותי של התפתחות הביופילם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

תודתי שרי קוצ&#39;מה, פיט ניואל ורוברט שאנקס למתן את התמונות באיור 1. עבודה זו נתמכה על ידי NIH כדי להעניק R01AI083256 GAO

1. גידול biofilm <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדול תרבות של Pseudomonas aeruginosa wild-type או זן מוטנטי על הלילה בינוני עשיר (LB כלומר) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את 1:100 על תרבות הלילה לתוך מדיום חדש עבור מבחני biofilm. Biofilm תקן assay בינונית פ aeruginosa M63 הוא מדיום מינימלי בתוספת מגנזיום סולפט, גלוקוז וחומצות casamino (ראו טבלה). כפי biofilm קידום חלופה בינונית מגרה צמיחה planktonic פחות biofilm חזקים יותר, גלוקוז וחומצות casamino ניתן להחליף ארגינין כמו פחמן הבלעדי מקור אנרגיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 100 μL של דילול לכל היטב בקערה 96 באר. עבור מבחני כמותי, אנו משתמשים בדרך כלל 4-8 בארות לשכפל עבור כל טיפול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את הצלחת microtiter במשך 4-24 שעות על 37 ° C. </li></ol> 2. מכתים את biofilm <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה, לזרוק את התאים על ידי סיבוב הצלחת שוב רועדת את הנוזלים החוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות את הצלחת להטביע באמבטיה קטנה של מים (כלומר, להשתמש בתחתית תיבות פיפטה טיפ P1000 pipetmen כמו באמבטיה). לנער את המים. חזור על תהליך זה פעם שנייה. צעד זה מסייע להסיר תאים פנויים ורכיבים התקשורת שניתן מוכתם בשלב הבא, מורידה באופן משמעותי מכתים רקע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 125 μL של פתרון 0.1% סגול קריסטל במים היטב כל הצלחת microtiter. לבשו כפפות וחלוק מעבדה תוך ביצוע הפתרון. היזהר בעת שקילת את קורות החיים כאבקה הוא hydroscopic ו בקלות כתמים ביגוד, עור וכו ' </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את הצלחת microtiter בטמפרטורת החדר למשך 10-15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את צלחת 3-4 פעמים במים על ידי השריית באמבט של מים כפי שתואר לעיל, לנער החוצה כתם במרץ על ערימה של מגבות נייר כדי לפטור את הצלחת של כל התאים עודפי צבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את הצלחת microtiter הפוך ויבש למשך כמה שעות או למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מבחני איכותי, בארות יכול להצטלם כשהוא יבש. </li></ol> 3. כימות biofilm <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 125 μL של חומצה אצטית 30% מים היטב כל הצלחת microtiter כדי solubilize קורות חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את הצלחת microtiter בטמפרטורת החדר למשך 10-15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 125 μL של קורות חיים solubilized לצלחת שטוחה microtiter תחתית חדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת ספיגת בקורא צלחת ב 550 ננומטר באמצעות חומצה אצטית 30% מים ריק. </li></ol> 4. נציג תוצאות: <img src="/files/ftp_upload/2437/2437fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. מראה תוצאה נציג ליצירת מבחני biofilm שבוצעו עבור Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens ו סטפילוקוקוס. (א) להציג צד של הבאר עם biofilm של P. aeruginosa (8 שעות, 37 ° C). (ב) להציג צד של הבאר עם biofilm של פ fluorescens (6 שעות, 30 ° C). (ג) מבט מלמעלה למטה של biofilm נוצר על ידי ס aureus בצלחת שטוחה תחתית microtiter (שתי בארות, 24 שעות, 37 ° C). פ aeruginosa ו פ fluorescens הן אורגניזמים ניעתי וליצור biofilm בממשק אוויר הנוזל. Aureus ש 'אי - ניעתי וצורות biofilm בתחתית הבאר.

<ol><li>O'Toole, G. A., Kolter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+biofilm+formation+in+Pseudomonas+fluorescens+WCS365+proceeds+via+multiple%2C+convergent+signalling+pathways%3A+a+genetic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Initiation of biofilm formation in Pseudomonas fluorescens WCS365 proceeds via multiple, convergent signalling pathways: a genetic analysis.</a> Mol. Microbiol. 28, 449-461 (1998).</li>
<li>O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aO%27Toole%2C+GA+%22Methods+in+Enzymology%22">Methods in Enzymology</a>. Doyle, R. J. , Academic Press. San Diego, CA. 91-109 (1999).</li>
<li>Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+basis+for+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+antibiotic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genetic basis for Pseudomonas aeruginosa biofilm antibiotic resistance.</a> Nature. 426, 306-310 (2003).</li>
<li>Kuchma, S. L., Connolly, J. P., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-component+regulatory+system+regulates+biofilm+maturation+and+type+III+secretion+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">A three-component regulatory system regulates biofilm maturation and type III secretion in Pseudomonas aeruginosa.</a> J Bacteriol. 187, 1441-1454 (2005).</li>
<li>Caiazza, N. C., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SadB+is+required+for+the+transition+from+reversible+to+irreversible+attachment+during+biofilm+formation+by+Pseudomonas+aeruginosa+PA14%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">SadB is required for the transition from reversible to irreversible attachment during biofilm formation by Pseudomonas aeruginosa PA14.</a> J Bacteriol. 186, 4476-4485 (2004).</li>
<li>Shanks, R. M., Sargent, J. L., Martinez, R. M., Graber, M. L., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheter+lock+solutions+influence+staphylococcal+biofilm+formation+on+abiotic+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Catheter lock solutions influence staphylococcal biofilm formation on abiotic surfaces.</a> Nephrol Dial Transplant. 21, 2247-2255 (2006).</li>
<li>Caiazza, N. C., Merritt, J. H., Brothers, K. M., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inverse+regulation+of+biofilm+formation+and+swarming+motility+by+Pseudomonas+aeruginosa+PA14%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Inverse regulation of biofilm formation and swarming motility by Pseudomonas aeruginosa PA14.</a> J. Bacteriol. 189, 3603-3612 (2007).</li>
<li>Hinsa, S. M., Espinosa-Urgel, M., Ramos, J. L., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+reversible+to+irreversible+attachment+during+biofilm+formation+by+Pseudomonas+fluorescens+WCS365+requires+an+ABC+transporter+and+a+large+secreted+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Transition from reversible to irreversible attachment during biofilm formation by Pseudomonas fluorescens WCS365 requires an ABC transporter and a large secreted protein.</a> Mol Microbiol. 49, 905-918 (2003).</li>
<li>Mack, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+transposon+mutants+of+biofilm-producing+Staphylococcus+epidermidis+impaired+in+the+accumulative+phase+of+biofilm+production%3A+genetic+identification+of+a+hexosamine-containing+polysaccharide+intracellular+adhesin%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Characterization of transposon mutants of biofilm-producing Staphylococcus epidermidis impaired in the accumulative phase of biofilm production: genetic identification of a hexosamine-containing polysaccharide intracellular adhesin.</a> Infect. Immun. 62, 3244-3253 (1994).</li>
<li>Vidal, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+an+Escherichia+coli+K-12+mutant+strain+able+to+form+biofilms+on+inert+surfaces%3A+involvement+of+a+new+ompR+allele+that+increases+curli+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Isolation of an Escherichia coli K-12 mutant strain able to form biofilms on inert surfaces: involvement of a new ompR allele that increases curli expression.</a> J. Bacteriol. 180, 2442-2449 (1998).</li>
<li>Junker, L. M., Clardy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screens+for+small-molecule+inhibitors+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">High-throughput screens for small-molecule inhibitors of Pseudomonas aeruginosa biofilm development.</a> Antimicrob Agents Chemother. 51, 3582-3590 (2007).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

שיטה זו יכולה להיות שונה לשימוש עם מגוון רחב של מינים של חיידקים. חיידקים ניעתי בדרך כלל לדבוק קירות ו / או תחתית של בארות, בעוד שאינם ניעתי חיידקים בדרך כלל לדבוק התחתון של בארות. תנאים אופטימליים ליצירת biofilm (כלומר, מדיום גידול, טמפרטורה, זמן הדגירה) צריכה להיקבע באופן אמפירי עבור כל חיידק. אני ממליץ על ביצוע מספר רב של משכפל עבור כל מתח או מצב (4-8), כולל שליטה חיובית, ואם אפשר, ביקורת שלילית על כל צלחת.

<table><tbody><tr><td>1 X M63</td><td></td><td></td><td>הכינו תמיסת מלאי 5X M63 על ידי המסה של 15 גרם KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 35 גרם K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;אופטימיזציה של היפר-פרמטרים (HPO)&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; ו-10 גרם (NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;כל כך&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; ב-1 ליטר מים. תמיסת מלאי זו&amp;#8211;אין צורך בסטריליזציה באוטוקלאב וניתן לאחסן בטמפרטורת החדר. יש לדלל את תמיסת המקור (5X) ביחס של 1:5, לבצע סטריליזציה באוטוקלאב, לצנן, ולאחר מכן להוסיף את הרכיבים הרצויים.</td></tr><tr><td>KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;הזמנת רכש&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher Scientific</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;אופטימיזציה של היפר-פרמטרים&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher Scientific</td><td>P288-500</td><td></td></tr><tr><td>(NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;מערכת הפעלה&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5132</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום סולפט</td><td>Fisher Scientific</td><td>M63-500</td><td>הוסף עד לריכוז סופי של 1 mM. הכן כמלאי (stock) בריכוז 1 M במים ועקר באוטוקלב.</td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>Fisher Scientific</td><td>D16-3</td><td>הוסף עד לריכוז סופי של 0.2%. הכן תמיסת מלאי בריכוז של 20% במים ועקר באוטוקלאב.</td></tr><tr><td>חומצות אמנו קזאיניות</td><td>BD Biosciences</td><td>223050</td><td>הוסף עד לריכוז סופי של 0.5%. הכן כתמיסה מרוכזת (stock) בריכוז של 20% במים ועקר באוטוקלאב.</td></tr><tr><td>ארגינין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5131</td><td>הוסף עד לריכוז סופי של 0.4%. הכן כתמיסה מרוכזת (stock) בריכוז של 20% במים ובצע סטריליזציה באמצעות סינון. מקור הפחמן/אנרגיה חלופי זה יכול להחליף גלוקוז וחומצות קזאמינו (casamino acids).</td></tr><tr><td>פלטות מיקרוטיטר</td><td>BD Biosciences</td><td>353911</td><td>Falcon 3911, Microtest III, פלטות בדיקה גמישות, 96 בארות, תחתית בצורת U, לא סטריליות, ללא טיפול לתרבית רקמה.</td></tr><tr><td>מכסי פלטות מיקרוטיטר</td><td>BD Biosciences</td><td>353913</td><td>ניתן להשתמש במכסים שוב לאחר ניקוי באמצעות אתנול 95% במים.</td></tr><tr><td>קריסטל ויולט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>229641000</td><td>יש להכין כתמיסה בריכוז של 0.1% במים.</td></tr></tbody></table>

biofilm microtiter תבשיל גיבוש assay

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Biofilms הן הקהילות של חיידקים המצורפת משטחים, אשר ניתן למצוא הגדרות רפואה, תעשייה טבעי. למעשה, החיים biofilm כנראה מייצג את הרוב במצב של צמיחה עבור חיידקים ברוב הסביבות. Biofilms בוגר יש כמה מאפיינים ברורים. חיידקים biofilm מוקפים בדרך כלל על ידי מטריצה ​​תאיים המספק מבנה והגנה לקהילה. חיידקים הגדלים biofilm גם ארכיטקטורה מורכבת בדרך כלל מאפיין של macrocolonies (המכיל אלפי תאים) מוקפת תעלות מלאות נוזל. Biofilm מבוגר חיידקים גם ידוע לשמצה בשל התנגדותם מגוון של סוכני מיקרוביאלית כולל אנטיביוטיקה רלוונטיות קלינית. Assay צלחת microtiter הוא כלי חשוב ללימוד בשלבים המוקדמים של היווצרות biofilm, וכן הוחל בעיקר ללימוד biofilms חיידקי, אם כי זה assay שימש גם ללמוד היווצרות biofilm פטרייתי. מכיוון assay זה משתמש סטטי, אצווה צמיחה התנאים, זה לא לאפשר היווצרות של biofilms בוגרת הקשורות בדרך כלל עם מערכות התא זרימה. עם זאת, assay כבר יעילה בזיהוי גורמים רבים נדרש ייזום של היווצרות biofilm (כלומר, שוטונים, פילי, adhesins, אנזימים המעורבים מחייב מחזורית-di-GMP ו מטבוליזם) ו גם גנים המעורבים בייצור פוליסכריד תאיים. יתר על כן, העבודה שפורסם עולה כי biofilms גדל מנות microtiter לעשות לפתח כמה מאפיינים של biofilms בוגרים, כגון סובלנות עמידות לאנטיביוטיקה כדי effectors המערכת החיסונית. זו מנה פשוטה assay microtiter מאפשר היווצרות של biofilm על קיר / או התחתון של צלחת microtiter. אופי תפוקה גבוהה של assay עושה את זה שימושי עבור מסכי גנטי, כמו גם בדיקות biofilm היווצרות של זנים רבים בתנאים צמיחה שונים. גרסאות של assay זה שימשו כדי להעריך היווצרות biofilm מוקדם עבור מגוון רחב של חיידקים, כולל אך לא מוגבל, pseudomonads, Vibrio cholerae, Escherichia coli, staphylocci, enterococci, mycobacteria ופטריות. בפרוטוקול המתואר כאן, נתמקד השימוש assay זה ללמוד היווצרות biofilm על ידי Pseudomonas aeruginosa אורגניזם מודל. ב assay זה, בהיקף של היווצרות biofilm נמדדת באמצעות גביש צבע סגול (CV). עם זאת, מספר כתמי colorimetric ו מטבוליות אחרות דווחו על כימות של היווצרות biofilm באמצעות assay צלחת microtiter. , להקל על העלות הנמוכה והגמישות של assay צלחת microtiter עשה את זה כלי חיוני ללימוד biofilms.

Assay מתאר אמצעי מהיר למדוד היווצרות biofilm מוקדם חיידקים ופטריות. שיטה זו משתמשת צלחת microtiter כמו לתשתית להיווצרות חיידקים biofilm ו biofilm היא דמיינו באמצעות סגול זן קריסטל. Assay מספק גם assay איכותי או כמותי ליצירת biofilm מוקדם.

Biofilm microtiter תבשיל גיבוש Assay

ביופילמים הם קהילות של מיקרובים המהדבקים למשטחים, אשר ניתן למצוא בסביבות רפואיות, תעשייתיות וטבעיות. למעשה, חיים בביופילם...

המטרה הכללית של הליך זה היא להקים ולחקור ביופילמים בתוך פלטת מיקרוטיטר. דבר זה מושג תחילה על ידי הוספת תרבית חיידקים לפלטה של 96 בארות. לאחר מכן, התרבית מדגרה בטמפרטורה ובזמן המתאימים, בהתאם למיקרואורגניזם, כדי לצבוע את הביופילם.מוסיפים Crystal violet לכל באער עם חיידקים, ולאחר מכן שוטפים את החיידקים. לבסוף, מצלמים את הבאערים ומכמתים את כמות החיידקים. בסיכומו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות את ההצטברות וההיווצרות של ביופילמים לאורך זמן באמצעות מדידת ה-Crystal violet.היתרון המרכזי של שיטה זו הוא שהיא מאפשרת לחוקרים להעריך במהירות היווצרות של ביופילם באורגניזמים חיידקיים ופטריות. ניתן להגדיר אותה גם עבור סריקות גנטיות בתפוקה גבוהה, או לזיהוי תרכובות טיפוליות חדשות המעכבות היווצרות ביופילם. הכינו תרבית לילה של 5 mL של זן הבר של pseudomonas, aerogen, או זן מוטנטי.בתווך LB, דללו 10 µL של תרבית לתוך 1 mL של תווך M 63 טרי, תווך מינימלי המועשר במגנזיום, סולפט, גלוקוז וחומצות קזאין. לאחר מכן, באמצעות פיפט, העבירו 100 µL של התרבית המדוללת לבארות נפרדות בלוחית 96 בארות בעלת תחתית עגולה. דגרו את הלוחית בטמפרטורה של 37 °C למשך 4 עד 24 שעות כדי לאפשר צמיחה של ביופילם.לאחר שנוצרו הביופלמים, הוצא את הפלטה מהאינקובטור והסר את העלומות של התרבית על ידי הפיכת הפלטה וניעור הנוזל החוצה. לאחר מכן, טבול ב

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

אנו מתארים שיטה פשוטה, מהירה וחזקה...

96 microtiter ובכן פלייט מבוססי שיטה ליצירת ניטור ובדיקה של רגישות נגד פטריות קנדידה אלביקנס Biofilms

סרטון זה מדגים בדיקה לסינון תרכובות אנטי-מיקרוביאליות שמחסלות ביעילות ביופילמים באמצעות לוחית יתד. המתודולוגיה מנטרת את המצב המטבולי של הביופילם לאחר הטיפול בתרכובות מיקרוביאליות, מה שמקל על קביעת ריכוז מיגור הביופילם המינימלי.

בדיקת ביופילם של צלחת יתד להקרנת חומרים אנטיבקטריאליים

הסרטון מדגים בדיקת היצמדות בשלב מוצק להערכת היווצרות ביופילם. בצלחת מרובת בארות, חיידקים במדיה בתוספת מלח מרה נצמדים למשטחים מוצקים, ויוצרים ביופילמים, אשר אושרו על ידי קולורימטריה באמצעות צביעה סגולה קריסטלית וטיפול באתנול.

בדיקת היצמדות לשלב מוצק להערכת היווצרות ביופילם

הסרטון מציג בדיקת פיזור ביופילם באמצעות צלחת מרובת בארות. חיץ וטיפול בגלוקוז מפרקים את הביופילם, משחררים חיידקים, בעוד מלחי מרה גורמים ללחץ, ושומרים על חיידקים בחומר הפולימרי החוץ תאי המגן. פיזור גבוה יותר עם חיץ וגלוקוז מאשר פירוק מוצלח של ביופילם, המוערך על ידי מדידת יחידות יוצרות מושבה.

איתור פירוק ביופילם באמצעות בדיקת פיזור

רוב הזיהומים החיידקיים מייצרים ביופילם. מתוקף הסביבה שלהם, חיידקים הקשורים לביופילם הם לעתים קרובות עמידים לתרופות פנוטיפיות. מולקולות אנטיבקטריאליות חדשות שהורגות חיידקים בביופילמים נמצאות אפוא בעדיפות גבוהה. אנו מקימים בדיקה לסינון מהיר של תרכובות אנטי-מיקרוביאליות היעילות בהדברת ביופילמים.

מיקוד Associated Biofilm<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; Assay רגישות בסמים בהתבסס Resazurin שימוש

מחקר זה מציג את הפיתוח של מתודולוגיות הניתנות לשחזור לחקר מעכבי ביופילם והשפעותיהם על Bacillus subtilis multicellularity.

מתודולוגיות לימוד<em&gt; B. subtilis</em&gt; Biofilms כמודל לאפיון מולקולה קטנה Biofilm מעכבי

זיהומי ביופילם מראים סבילות גבוהה לכימותרפיה. אין בדיקה אחת שתופסת את המורכבות של ביופילמים. במקום זאת, יש צורך בבדיקות משלימות. אנו מציגים פלטפורמת סינון (שפותחה עבור S. aureus) המשלבת מבחני כדאיות, ביומסה ומטריצת ביופילם. זה מאפשר גילוי תרופות אנטי-ביופילם, כולל הערכה של השפעות כימותרפיות ארוכות טווח.

פלטפורמה של מבחנים אנטי biofilm המתאים לחקירת ספריות תרכובת טבעיות

פרוטוקול זה מאפשר לקורא לנתח מלח מרה-induced ביופילמים בתוך פתוגנים המעית באמצעות גישה רב פנים כדי ללכוד באופי הדינמי של biofilms חיידקי על-ידי הערכת הדבקות, היווצרות מטריצה חוץ-תאית חומר הפולימרים, פיזור.

מלח מרה-induced ביופילמים בתוך המעית פתוגנים: טכניקות וכימות

פרוטוקול זה מציג מתודולוגיה לביצוע צמיחת ביופילם ומדידות ביומסה באמצעות התקני לוח PCR עמוקים בהרכבה עצמית עבור הקרנת ביופילם סטטית של מכסה 96-היטב.

ייצור ביופילם ביומסה חיידקית גדולה יותר באמצעות מכשירי מיקרופלאט עמוק באר עמוקה צלחת PCR

פרוטוקול מבוסס צלחת מיקרוטיטר 96-well המשתמש ב-2,3-ביס(2-מתוקסי-4-ניטרו-5-סולפופניל)-5-קרבוקסילייד-2H-tetrazolium (XTT) מתואר כאן, כדי לחקור את השפעת הנוגדנים על ביופילמים שנוצרו על ידי C. tropicalis. ניתן להשתמש בפרוטוקול in vitro זה כדי לבדוק את ההשפעה של תרכובות אנטי-פטרייתיות חדשות פוטנציאליות על הפעילות המטבולית של תאי מין קנדידה בביופילמים.

בדיקת הפחתה מסיסה המבוססת על טטרזוליום להערכת השפעת נוגדנים על ביופילמים של קנדידה טרופיקליס

למדו שיטה מהירה לניטוץ ביופילם מוקדם בחיידקים ובפטריות באמצעות צביעת קריסטל ויולט בלוח מיקרוטיטר 96-באר. שיטה זו מאפשרת ניתוח איכותני וכמותי של התפתחות הביופילם.

Biofilm microtiter תבשיל גיבוש Assay

גלה סרטונים נוספים