הערכת חדירות שכבת התא במיקובקטריום טוברקולוזיס מתמשך שאינו משכפל

התחילו עם צינורות המכילים את שלב ה-NRP של Mycobacterium tuberculosis שאינו משכפל, שבו שכבה חיצונית מעובה.

הוסף חרוזי זכוכית לצינור אחד ונער אותו כדי לשבש מכנית את השכבה החיצונית של המיקובקטריה, מה שמשפר את החדירה.

לאחר מכן, העבירו את השעיין המיקובקטריאלי המוכה בחרוזים לצינור טרי.

הוסיפו את ריפמפיצין עם סימון פלואורסצנטי, אנטיביוטיקה נגד שחפת, להן לתלושיות התאים הלא מטופלות וגם לתלושיות החרוזים.

דגרו עם ניעור כדי לאפשר לריפמפיצין מסומן בפלואורסצנטיות להיכנס למיקובקטריה.

עם הזמן, יותר ריפמפיצין נכנס למיקובקטריה.

צנטריפוגה את הדגימות כדי להפריד בין התאים ולהסיר את הסופרנטנט המכיל ריפמפצין לא קשור.

החזירו את המיקובקטריקה למדיה טרייה.

נתח את הדגימות באמצעות ציטומטריית זרימה. כאשר תאים עוברים דרך קרן לייזר, הם פולטים פלואורסצנציה פרופורציונלית לפלואורסצנט-ריפמפיצין התוך-תאי.

בנקודות זמן שונות, תאי NRP שלא טופלו מראים פלואורסצנציה נמוכה יותר מאשר תאים שנפגעו בחרוזים.

דבר זה מצביע על כך שהשכבה החיצונית המעובה מגבילה את כניסת הריפמפיצין, ותומכת בהתמדה חיידקית במהלך האינטראקציה בין המארח לפתוגן.