ביצוע כרומטוגרפיה בשכבה דקה להערכת פירוק אקסופוליסכריד חיידקי

התחל עם סופרנטנטים מותססים המכילים אקסופוליסכרידים מפורקים ולא מפורקים, או EPS.

EPS אלו מתקבלים במהלך התסיסה, כאשר אוכלוסיות חיידקי צואה שונות בכל סופרנטנט פועלות על EPS בצורה שונה.

אתר את הסופרנטנטים סמוך לבסיס של לוח כרומטוגרפיה בשכבה דקה מצופה מראש בפאזה סטציונית פולרית.

ייבשו את הלוח באוויר, ואז מניחים אותו בתא המכיל פאזה ניידת עם קוטביות נמוכה יותר מהפאזה הנייחית.

כאשר השלב הנייד עולה, EPS נודדים בהתאם לקוטביות ולגודל שלהם.

EPS גדולים ולא מתפרקים מגיבים חזק עם השלב הנייח ונשארים קרובים למקור.

שברים קטנים ומפורקים נקשרים חלש ונודדים כלפי מעלה עם השלב הנייד.

הסר את הפלטה וייבש אותה באוויר.

טבלו את הצלחת במגיב שמכתים פחמימות שמגיב עם EPS.

מייבש את הצלחת באוויר, ואז חמם אותה כדי לייבש את ה-EPS וליצור פסים צבעוניים.

רצועה אחת ליד המקור מאשרת EPS לא מפורק, בעוד שמספר רצועות מאשרות פירוק EPS על ידי חיידקים.

העמיסו 0.2 מיקרוליטר מהסופרנטנטים המותססים על כל צלחת אלומיניום ג'ל סיליקה מצופה מראש 60 TLC וסובבו כדי להתפשט. לאחר מכן, השתמשו במייבש שיער עם אוויר חם לייבוש.

טבלו קצה אחד של הלוחות שנבדקו ב-20 מיליליטר של תמיסת חומצה פורמית:n-בוטנול:מים למשך מספר דקות, עד שהאלקטרופורזה מגיעה כמעט עד הקצה השני. אחר כך להוציא את הצלחות עם מלקחיים, ולייבש עם מייבש שיער. לאחר מכן, השרו את הצלחות בחומר האורצינול במשך שתי דקות כדי לצבוע ולהתייבש שוב.

העבר את הצלחות לתנור אפייה ב-120 מעלות צלזיוס כדי להתחמם במשך שלוש דקות. לאחר מכן צלם את הפלטה כדי להעריך את התדרדרות ה-EPS על ידי מדידת תחומי TLC.