חקר פעילות מיקרוביאלית במעי האנושי על אקסופופוליסכרידים

התחל עם הסופרנטנט שנוצר על ידי מיקרוביוטה במעי האנושי במהלך תסיסה חוץ-גופית של אקסופוליסכרידים. הסופרנטנט מכיל חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFAs) ומטבוליטים נוספים.

הוסיפו חומצה מטפוספורית להורדת ה-pH של הסופרנטנט ומערבב מערבב יסודי. זה ממיר את SCFAs לצורות פרוטוניות שלהם, המתאימות לניתוח כרומטוגרפיית גז.

צנטריפוגה להפרדת פסולת ואיסוף הסופרנטנט המכיל SCFAs ומטבוליטים אחרים.

לסנן את הסופרנטנט כדי להסיר שאריות ולמנוע הפרעות לכרומטוגרפיה.

במערכת כרומטוגרפיית גז בעלת ביצועים גבוהים, יש להזריק את הסופרנטנט לפתח החימום כדי לאדות אותו. לאחר מכן, מערבבים את האדים עם גז אינרטי ומעבירים אותם דרך עמודה קוטבית סטטיסטית להפרדה.

SCFAs מתקשרים עם הפאזה הנייחית של העמודה ומתפצלים בהתאם לנדיפותם, כאשר חומצות שרשרת קצרות יוצאות מוקדם יותר מחומצות ארוכות.

זיהוי ריכוזי SCFAs שונים על ידי השוואת התוצאות עם תקנים פנימיים. זה משקף פירוק מיקרוביאלי של אקסופוליסכרידים בתנאים דמויי מעי

כדי לחקור את השפעות ה-EPS על ייצור SCFA, הוסף 1 מיליליטר מהסופרנטנטים המותססים לצינורות צנטריפוגות בנפח 2 מיליליטר ולהוסיף 0.2 מיליליטר של 25 אחוז משקל/נפח של חומצה מטפוספורית לכל דגימה. מערבב לערבב היטב את הפתרונות. צנטריפוגה את התערובות ב-13,000 פעמים גרם למשך 20 דקות.

בינתיים, יש להכין תמיסות של חומצות אצטיות, פרופיוניות, בוטיריות, איזובוטריות, ולריות ואיזווולריות בעובי 120 מילימולר. לאחר מכן מוסיפים 1 מיליליטר מכל חומצה מוכנה לצינור המכיל 1.2 מיליליטר של חומצה מטפוספורית במשקל 25 אחוז נפח ומעמיסים אותם לבקבוק הדגימה של כלי הכרומטוגרפיה הגזית כקוקטיילים הסטנדרטיים.

הוציאו את הצינורות מהצנטריפוגה, והעבירו את הסופרנטנטים לצינורות טריים. השתמשו במזרק המצויד במסנן 0.22 מיקרון כדי לסנן את הסופרנטנטים לצינורות חדשים לניתוח גז-כרומטוגרפיה.