הדמיית טיים-לאפס של הפרדת כרומוזומים בחיידקים מסומנים פלואורסצנטית
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 6:21 דק׳ • March 31st, 2026
התחילו עם כרית אגרוז עשירה בחומרים מזינים על מסגרת מתכתית המכילה חיידקים המבטאים מקור כרומוזומים מסומנים פלואורסצנטי ומיקרוספירות פלואורסצנטיות.
כרית האגרוז תומכת בחיבור חיידקים ובניידות, ומיקרוספירות פלואורסצנטיות משמשות כהפניה להפרדת כרומוזומים במעקב.
הוסיפו שמן טבילה לעדשת האובייקטיב בתא הדגירה המחומם מראש של מיקרוסקופ רחב שדה הפוך.
הנח את הדגימה מעל העדשה, ואז התמקד באזור המכיל מספר חיידקים ולפחות מיקרוספירה פלואורסצנטית אחת.
התחילו הדמיית טיימ-לאפס וצילמו תמונות גם של ניגודיות פאזה וגם תמונות פלואורסצנציה.
מקור השכפול המתויג פלואורסצנטי מופיע כאשכול בהיר ליד קצה אחד של התא.
במהלך החלוקה, המקור משכפל; אשכול אחד נשאר בקצה המקורי בעוד שהאשכול השני נודד לקצה התא החדש.
מבנה זה מאפשר מעקב אחר הפרדת הכרומוזומים במספר חלוקות וניתן להתאים אותו להמחשת תהליכים דינמיים דומים בחיידקים אחרים, כולל מינים פתוגניים במהלך אינטראקציות עם המארח.
כדי לבצע מיקרוסקופ טיימלפס, הפעל את המיקרוסקופ והפעל את תוכנת בקרת המיקרוסקופ. בחר את המטרה הנכונה ואת המראות והמסנן הנכונים כדי לצלם תמונות קונטרסט פאזה וכן תמונות של חלבונים ירוקים-פלואורסצנטיים, אדומים-פלואורסצנטיים או צהובים-פלואורסצנטיים. הוסיפו טיפה של שמן טבילה איכותי על עדשת האובייקטיב ולתחתית הדגימה המוקדמת בטמפרטורה של 32 מעלות צלזיוס.
עם צד החור לכיוון
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים