אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:51 דק׳ • March 31st, 2026
קחו מלאי של זן עמיד לאנטיביוטיקה של G. vaginalis, חיידק אנאירובי הקשור לזיהומים בדרכי השתן בעכברים.
במהלך זיהום ראשוני בשלפוחית השתן, E. coli האורופתוגני יוצר מאגרים שקטים בתוך תאי האפיתל של שלפוחית השתן.
חשיפה מאוחרת ל-G. vaginalis גורמת להפרשה של תאים שטחיים המתווכים על ידי רעלנים, ומאפשרת ל-UPEC רדום להופיע מחדש ולגרום לדלקות בדרכי השתן החוזרות.
כדי להכין את חיסון ה-G. vaginalis , מרחו את המלאי על צלחת אגר תזונתי ללא אנטיביוטיקה כדי לאפשר התאוששות חיידקים.
דגירה אנאירובית כדי לקבל מושבות גדלות פעילות.
העבר לולאה מלאה במושבות צפופות למרק תזונה ללא אנטיביוטיקה.
דגרו סטטית בתנאים אנאירוביים עד שמגיעים לריכוז החיידקים הרצוי.
מדדו צפיפות אופטית כדי להעריך את הריכוז.
העבר את המתלה לצינור, צנטריפוגה כדי לפרוק את החיידקים, להשליך את הסופרנטנט, ולהחזיר אותו בבופר.
הכינו דילול סדרתי וציפו אותם על מדיום המכיל אנטיביוטיקה כדי לאפשר גדילה סלקטיבית של G. vaginalis ולמנוע זיהום. ספירת מושבות כדי לקבוע את ריכוז האינוקולום.
התחל ברכיבה על ה-G. הנרתיק מתוח ממאגר מקפיא של מינוס 80 מעלות צלזיוס אל תוך תא אנאירובי. להניח את החיידקים על פלטת NYCIII בלי אנטיביוטיקה. דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באופן אנאירובי במשך 24 שעות.
בתא האנאירובי, הסנן חמישה מיליליטרים של מדיום אנאירובי NYCIII בלולאה של מיקרוליטר מלא בתאים מהצלחת NYCIII, ודוגר את התרבית סטטית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתנאים אנאירוביים למשך 18 שעות. אין לכלול אנטיביוטיקה במדיום הגידול. קבעו אתה-OD 600 של התרבית באמצעות ספקטרופוטומטר.
לאחר מכן, צנטריפוגה ב-9,600 פעמים גרם למשך דקה אחת ושאופי את המדיה. החזירו את הכדור החיידקי ב-PBS לריכוז הרצוי ומדללים וצלוחים סדרתיים את האינוקולה.