אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:04 דק׳ • February 26th, 2026
התחילו עם לוח רב-בארות המכיל הכנסת באר מצופה בקולגן.
הוסיפו מדיום התפשטות לבאר.
החומרים המזינים בתווך מקדמים התרבות תאים, בעוד שמעכבי ההתמיינות שומרים על מצב דמוי גבעול.
הוסיפו תלייה של אשכולות תאי אפיתל שמקורם בתרביות תאי גזע במעי הגס להחדרת הבאר והדגירה.
התאים נדבקים למשטח המצופה בקולגן ומקבלים חומרים מזינים הן מהתאים העליונים והן מהתחתונים.
המעכבים מונעים התמיינות תאית ומסייעים להתרבות אשכולות התאים.
באמצעות מיקרוסקופ פאזה-ניגודיות, התבונן בתרבית.
לאחר יצירת השכבה המונוליירית, החליפו את מדיום התרבית במדיום טרי ללא מעכבי התמיינות תאים.
זה מקל על התמיינות התאים לתאי אפיתל במעי הגס הבוגרים עם חיבורים צמודים.
תאים אלו מפרישים ריר ומפתחים שכבה מונו-שכבתית פונקציונלית המדמה את המחסום המעי הפיזיולוגי למחקרי אינטראקציה בין מארח לפתוגן.
פיפט 600 מיקרוליטר של מדיום התרחבות אל החלל שמתחת לכל תוספה. פיפט 100 מיקרוליטר של תליון תא מהמבחנה לכל הכנסה.
החזירו את הצלחת לאינקובטור תרבית הרקמה והשאירו אותה ללא הפרעה לפחות 12 שעות. הימנעו מרעידה או הטיה חדה של הצלחת. לאחר הדגירה, הניחו את הפלטה על מיקרוסקופ אור קונטרסט פאזה עם עדשה אובייקטיבית של פי 2.5 עד פי 10.
רענון עם מדיום תרבית ללא מעכבים כדי להפסיק את הטיפול בעיכוב. המשך לרענן את המדיום כל יומיים-שלושה עד למפגש המים.