יצירת ספרופלסטים מחיידקים גרם-שליליים

קחו מדיה המכילה אנטיביוטיקה החוסמת חלוקת תאים.

החסן אותו בחיידקים בצורת מוט וגרם-שליליים.

תדגר עם רעידות.

בנוכחות האנטיביוטיקה, החיידקים ממשיכים לגדול מבלי להתחלק ויוצרים סיבים ארוכים.

אסוף את התרבית וצנטריפוגה אותו בטמפרטורה נמוכה. השליכו את הסופרנטנט ושטפו את הסיבים בתמיסת סוכרוז כדי למנוע ליזה.

זרוק את תמיסת הסוכרוז.

הוסיפו בופר אחריו אנזימים ו-EDTA. EDTA מחליש את הממברנה החיצונית, ומאפשר לליזוזים להיכנס ולפרק את שכבת הפפטידוגליקן.

זה מסיר את דופן התא, ומאפשר לתא החיידק להתכווץ. DNase I שובר את ה-DNA הכרומוזומלי המשתחרר מהתאים ומונע הצטברות תאים.

הוסיפו תמיסה היפוטונית עם סיבוב עדין, כדי לאפשר לתא למשוך מים.

הממברנות הגמישות מאפשרות לתא לקבל צורה כדורית הנקראת ספרופלסט.

העבר אליקו המכיל את הספרופלסטים לשני צינורות עם תמיסה איזוטונית מקוררת לייצוב הספרופלסטים.

כדי להכין ספרופלסטים של אי.קולי גראם שליליים, דיללו את התרבית הלילית ביחס של 1 ל-100 ב-25 מיליליטר TSB בבקבוק של 250 מיליליטר, והחזירו את החיידקים לדוגמת הרעידות לעוד שעתיים וחצי. כאשר התמיסה מגיעה לצפיפות אופטית של 0.5 עד 0.8 ב-600 ננומטר, דיללו את התרבית ביחס של אחד לעשר ב-TSB טרי בבקבוק חדש בנפח 250 מיליליטר לדגירה שנייה של שעתיים וחצי עם ריכוז אפקטיבי סופי של 60 מיקרוגרם למיליליטר של צפלקסין.

לייצר סיבים חד-תאיים באורך של כ-50 עד 1