אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:42 דק׳ • February 26th, 2026
קחו תרבית של סטרפטוקוקוס קבוצה B או GBS, פתוגן חיידקי אופורטוניסטי.
מדלל את התרבית במדיום טרי ודגר כדי לקבל חיידקים מתחלקים באופן פעיל.
העבר את התרבית לצינור קוני.
צנטריפוגה כדי לפרוק את החיידקים, ואז להשליך את הסופרנטנט.
שטוף את החיידקים עם בופר.
תצנטריפוגה שוב, תסיר את הסופרנאנט, ותשהה את החיידקים בבופר.
לאחר מכן, השתמשו בעכבר נקבה שטופלה הורמונלית עם אפיתל נרתיקי מוכן, הרגיש יותר לזיהום.
לרסן את העכבר. בעזרת קצה פיפטה עדין, משחרר את השעון של GBS ללומן הנרתיק.
שחרר את העכבר, הרם את הזנב, ותן לכפות הקדמיות ללכת על משטח יציב.
זה מקדם שמירת חיסון בלומן הנרתיק, ומאפשר היצמדות ל-GBS.
בדקו את פתח הנרתיק לאיתור זרימה חזרה של האינוקולום.
החיידקים הדבוקים מתיישבים על פני האפיתל הנרתיק ויוצרים זיהום.
מודל העכבר עם זיהום בנרתיק מוכן למחקרים נוספים.
באותו יום של ההזרקה, גדלו תרבית נוזלית של חמישה מיליליטר, בין לילה, של זן GBS שמעניין בציר טוד יואיט, או THB, בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
למחרת בבוקר, תת-תרבית את ה-GBS בנפח של 1 עד 10 ב-THB טרי לדגירה של שעתיים עד שלוש בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, עד שהחיידקים מגיעים לשלב אמצע הלוג. לאחר מכן, העבר את תת-התרבית לצינור חרוטי סטרילי בנפח 15 מיליליטר, ובצנטריפוגה את תאי החיידקים. החזירו את הכדור ל-200 מיקרוליטר של PBS סטרילי.
לאחר מכן, הביאו את הנפח הכולל של המתלים ל-1 מיליליטר PBS ל-10 עכברים, כדי להגיעל-OD 600 של 0.4 בצינור תרבית חדש בנפח 5 מיליליטר. העבר את התרבית לצינור חדש בנפח 15 מיליליטר, ודחה מחדש את החיידקים. לאחר מכן, החזירו את התאים ב-PBS בעשירית מהנפח המקורי.
שמרו 50 מיקרוליטר מהחיידק לדילול סדרתי וציפוי על אגר THB, כדי לקבוע את ה-CFU המדויק של החיסון. לאחר מכן, משוך 10 מיקרוליטר של GBS לתוך קצה פיפטה טעינת ג'ל בנפח 200 מיקרוליטר, ואבטח ידנית את העור הרופף בצוואר, של החיה הראשונה, בין האגודל לאצבע המורה, ולאחר מכן קיבוע את הזנב. הכנס את קצה הפיפטה 5 עד 10 מילימטרים ללומן הנרתיק, ומשחרר את כל נפח החיסון.
לאחר מכן, שחררו מיד את הזנב והרימו את הזנב כדי להרים את הקצה האחורי של החיה, תוך כדי הליכה עם הכפות הקדמיות על משטח קשה. אחרי דקה, בדקי ויזואלית את פתח הנרתיק לאיתור זרימה חזרה של החיסון.