אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:34 דק׳ • February 26th, 2026
קחו עכבר נקבה שהתיישבה בנרתיק עם סטרפטוקוקוס בקבוצה B או GBS, פתוגן חיידקי אופורטוניסטי של דרכי הנרתיק.
הרסן את העכבר והכנס מטוש רטוב בבופר ללומן הנרתיק.
סובבי בעדינות את המטוש תוך הפעלת לחץ קל על דופן הנרתיק כדי להוציא חיידקים על פני השטח.
טבלו את המטוש בבופר וערבבו כדי להשעות את החיידקים.
מדלל באופן סדרתי את המתלה בבופר וציפוי אותו על אגר דיפרנציאלי כרומוגני המכיל מצע המקושר לכרומוגן.
דגרו כדי לאפשר צמיחת חיידקים.
במהלך הדגירה, GBS מבטא אנזים ספציפי שמהידרוליז את הסובסטרט הכרומוגני.
הכרוגן המשתחרר עובר חמצון ודימריזציה ספונטנית, ויוצר תרכובת בצבע ורוד או סגול.
כתוצאה מכך, נוצרות מושבות GBS בצבע ורוד או סגול, המובחנות ויזואלית ממושבות חיידקים אחרות.
ספור את המושבות כדי לכמת את עומס ה-GBS והעריך את ההתמדה שלו במודל העכבר.
לפני הדגימה, הרטיב מראש את הכותנה ב-PBS, ורסן אחד העכברים כפי שהודגם.
הכנסי את המטוש 10 מילימטרים ללומן הנרתיק, וסובבי בעדינות ארבע פעמים בכיוון השעון וארבע פעמים נגד כיוון השעון, תוך הפעלת לחץ קל על דופן הנרתיק.
הניחו את המטוש בצינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר המכיל 100 מיקרוליטר של PBS, וערבבו את הצינור והמטפלים במשך כ-15 שניות כדי לשחרר את החיידקים מסיבי הכותנה. לאחר מכן, מדללים כל דגימה בסדרה ב-PBS, וצלחת של 20 מיקרוליטר של 1 עד 10 עד 10,000 מדיללים על פלטת אגר בינונית דיפרנציאלית, המוכנה לפי הוראות היצרן, לדגירה ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. מושבות GBS יופיעו בצבע ורוד בוהק או סגול.