הערכה מיקרוסקופית של עיכוב היווצרות ביופילם בתיווך אנזימים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:47 דק׳ • February 26th, 2026
התחילו בשתי מיקרוספינות עם תחתית זכוכית המכילות תלויות של חיידק יוצר ביופילם.
צלחת הטיפול מכילה אנזים פעיל שמפריע לאותות, בעוד שמערכת הבקרה כוללת את האנזים המושבת.
כסו את הכלים ודגרו כדי לאפשר הידבקות חיידקית לפני השטח.
שטוף כדי להסיר תאים לא דביקים לזה, ואז הכנס מדיום טרי המכיל את האנזימים ודגם.
בצלחת הבקרה, החיידקים מתקשרים דרך מולקולות איתות ומייצרים חומרים פולימריים חוץ-תאיים (EPS), היוצרים ביופילם.
האנזים הפעיל מפרק את מולקולות האיתות, משבש את תפקודן ומפחית את יצירת הביופילם.
מלא מחדש במדיום טרי ודגר עוד כדי לחזק את השפעות הביופילם של האנזים.
הסירו את המדיום, הוסיפו לקטין עם תוויות פלואורסצנטיות, ודגרו כדי לאפשר קישור ללקטין ל-EPS.
שטוף כדי להסיר כל לקטין לא קשור.
דגרו עם קיבוע לשימור ארכיטקטורת הביופילם, ואז שטפו את התערונית.
לרכוש תמונות מיקרוסקופיות קונפוקליות להערכת דיכוי היווצרות ביופילם בתיווך אנזימים.
לביצוע מיקרוסקופ סורקת לייזר קונפוקלי, או CLSM, של ביופילמים של A. baumannii S1, יש לגדל תרבית של 5 מיליליטר של A. baumannii S1 ב-LB בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס במדמרה רועדת למשך 16 שעות. כוון את התרבות של A. baumannii S1 ל-OD600 של 0.8.
לאחר מכן השתמשו ב-LB טרי המכיל 1.2 מיליגרם למיליליטר של אנזים GKL מטוהר לדילול התרבית, 1 עד 100, והוסיפו 1 מיליליטר למיקרודיש זכוכית עם תחתית זכוכית
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים