אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:18 דק׳ • March 31st, 2026
התחילו עם צלחת תרבית המכילה מושבות מבודדות של חיידק קרקע.
קטף והחרין מושבה לתוך בקבוק תרבות מבולבל המכיל מדיום מזין.
לטפח את התרבות בניעור.
לבקבוק המעוקה יש חריצים פנימיים שמגבירים מערבולות בזמן הרעידות, ומגבירים את האוורור.
תהליך זה מבטיח פיזור חמצן אחיד ומונע הצטברות תאים ושקיעה, ומאפשר פיזור מזינים אחיד.
החיידקים מתרבים במהירות, יוצרים תלייה צפופה עם תאים המפגינים תכונות פיזיולוגיות אחידות.
במרווחים קבועים, אספו דגימה בקובטה.
באמצעות ספקטרופוטומטר, העבירו אור דרך הדגימה. כמות האור המועבר נמדדת כדי לכמת את צמיחת החיידקים, הידועה כצפיפות אופטית או OD.
תרביות חיידקיות נבחרות בשלב האקספוננציאלי ועד המוקדם של הסטציה, שכן תאים בשלב זה פעילים מאוד מטבולית ולכן רגישים ביותר לזיהום בקטריופאג' יעיל.
תאי ארתרובקטר מתורבתים ממושבות המפוספסות על צלחת אגר LB, מודגרות בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס למשך יומיים עד שלושה.
השתמש בלולאה סטרילית כדי לבחור מושבה ולהוסיף אותה ל-50 מיליליטר של מרק LB בבקבוק תרבית מבולבל. דגרו את הבקבוקון באינקובטור רועד במהירות 225 סל"ד בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס למשך כ-24 שעות כדי לקבל תאים אקספוננציאליים או סטציונריים מוקדמים לניסויי זיהום פאג'ים.
יש לעקוב מקרוב אחרי מצב הצמיחה החיידקיים כדי למנוע כניסה לתאים למצב הצמיחה הנייח האמצעי עד המאוחר. ה-ODהאידיאלי 600 לבידוד פאג' הוא בין 0.5 ל-0.7.