אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:06 דק׳ • March 31st, 2026
התחילו בשלפוחית עכבר משובשת, מנותקת, שנדבקה מראש ב-E. coli אורופתוגני המבטא β-גלקטוזידאז, המונחת בלוח רב-באר מצופה סיליקון.
הלומן של שלפוחית השתן פונה כלפי מעלה, וחושף את תאי האפיתל המכילים קהילות חיידקיות תוך-תאיות, או IBCs.
שטפו את שלפוחית השתן עם בופר כדי להסיר פסולת וחיידקים לא מחוברים.
לאחר מכן, הוסף קיבע ודגר לשימור מבנים תאיים וחיידקיים.
הסר את הקיבע ושטוף עם בופר.
לאחר מכן, שטוף עם בופר המכיל חומר ניקוי כדי לחדור את ממברנות התאים והחיידקים.
הסר את הבופר, ואז מוסיפים תמיסה של X-gal, סובסטרט של β-גלקטוזידאז, בתוספת מגיבים לחמצון רדוקס, ודגרו.
אקס-גל וראגנטים רדוקסיים נכנסים לחיידקים. β-גלקטוזידאז חותך את X-gal, ומייצר ביניים חסר צבע שמחומצן על ידי תגובות רדוקס ליצירת משקע כחול.
תחת מיקרוסקופ ניתוח, הנקודות הכחולות בשלפוחית מאשרות את תסמונת המעי הפנימי, מה שמעיד על זיהום בדרכי השתן.
לצורך ספירת IBC, לאחר קצירת השלפוחית, מניחים אותה בבאר מצופה סיליקון של צלחת 6 בארות עם PBS ומשתמשים במספריים כדי לחתוך אותה לשניים.
באמצעות סיכות מתכת קטנות הממוקמות לאורך הקצוות החיצוניים ביותר, יש לפרוש בעדינות את שלפוחית השתן כך שהלומן פונה כלפי מעלה וכמות האורותליום המקסימלית נחשפה. לאחר ביצוע צביעת LacZ כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט, יש לצפות ב-IBCs, שמופיעים כפנקטות כחולות תחת מיקרוסקופ ניתוח.