JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:40 דק' • March 31st, 2026
התחילו בעכבר מורדם עם מכסה צלחת פטרי מתחת לבטנו כדי לשמור על הגב אופקי.
לעכבר יש פצע כוויה בגבו שנדבק ב-Acinetobacter baumannii, פתוגן חיידקי גראם שלילי.
החיידקים מהונדסים גנטית לשאת אופרון ביולומינצנציה.
מקם את העכבר בתוך תא הדמיה ביולומינסנטי שנשמר בטמפרטורה אופטימלית והתחל בהדמיה.
באתר ההדבקה, הגנים luxA ו-luxB של אופרון הביולומינסצנציה מקודדים את אנזים הלוציפראז. הגנים של luxCDE מקודדים אנזימים המסנתזים את תת-הלוסיפראז.
לוציפראז מזרז חמצון תת-קרקעי ומייצר אור נראה, מה שהופך את החיידקים לזוהרים.
אות הביולומינסציה מצביע על נוכחות חיידקים פעילים מטבולית באתר הפצע.
באמצעות תוכנת הדמיה, כמת את עוצמת אות הביולומינסציה כדי להעריך את העומס החיידקי האפשרי.
מיד לאחר החיסון, יש לבצע הדמיה ביולומינסנטית על ידי הפעלת תוכנת ההדמיה החיה. בלוח הבקרה, לחץ על אתחול. לאחר מכן המתן עד שצבע קופסת הטמפרטורה יהפוך לירוק, מה שמעיד שטמפרטורת השלב בתא הדגימה הגיעה ל-37 מעלות צלזיוס.
הנח את העכבר המורדם על הבמה החמה בתא הדגימה עם הכוויות הנגועות ישירות מתחת למצלמה. לאחר מכן, בלוח הבקרה, שים סימן וי ליד "זוהר".
לאחר מכן בחר "חשיפה אוטומטית" כדי שזמן החשיפה להדמיה יוכל להיות אופטימלי על ידי תוכנת ההדמיה החיה בהתבסס על עוצמת הביולומיננציה. בחר "C" מתוך רשימת "שדה התצוגה". בחר באפשרות הסריקה בטווח הבינוני כדי לאפשר לתוכנה לקבוע את מרחק המוקד.
ואז שים סימן וי ליד ה-overlay. עכשיו, לחץ על "רכוש" כדי לתפוס את התמונה. ואז, בתיבת "ערוך תווית תמונה", לחץ אושר. יופיעו "חלון תמונות" ו"פלטת אגרה". הגדר את פרמטרי ה-Auto-ROI לבחירה אוטומטית.