הקמת ביופילמים חיידקיים-פטרייתיים חוצי ממלכה לחקר פתוגנזה אורלית

התחילו בתרביות של Streptococcus mutans, חיידק פתוגני דרך הפה, ושל Candida albicans, פתוגן פטרייתי אופורטוניסטי.

העבר מושבות מבודדות למדיום עשיר בחומרים מזינים ודגר במשך הלילה כדי להבטיח צמיחה פעילה.

צנטריפוגה לפליטה של התאים. הסר את הסופרנטנט והחזיר את התאים במי מלח סטריליים לריכוז מוגדר.

קחו צלחת רב-בארית מצופה בתמיסת רוק אנושית כדי לדמות את הסביבה הפהית.

הוסף את C. albicans ודגר כדי לאפשר היצמדות לציפוי הרוק. שטוף עם מי מלח סטריליים כדי להסיר תאים לא דביקים למים.

הוסף סרום מושבת חום ודגר כדי לעודד התפתחות ההיפא. שטוף את הסרום העודף.

הכניסו את S. mutans, ואז מדיום עשיר בסוכרוז ודגרו. S. mutans מפריש גלוקוזילטרנספראז, הנקשר ל-C. albicans mannans.

אנזים זה מזרז סוכרוז לגלוקנים על פני השטח הפטרייתיים, מעגן חיידקים להיפות ומקדם רבייה ויצירת מטריצות.

שיטה זו מניבה ביופילמים בין-ממלכותיים המדמים סינרגיה מיקרוביאלית בפתוגנזה הפה.

גדלו S. mutans ו-C. albicans על לוחות אגר דם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתנאים אירוביים.

לאחר מכן מעבירים מושבות בודדות של כל אורגניזם למבחנות המלאות ב-5 מיליליטר של עירוי מוח ללב, ומגדלים אותן במשך 18 שעות נוספות.

למחרת, צנטריפוגה את התרביות בעוצמה של 1,200 פעמים גרם למשך חמש דקות והשליכו את הסופרנטנט. החזירו את התאים לסליין פיזיולוגי והתאימו את_{ה-OD 550} ל-0.5 עבור C. al