אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:30 דק׳ • February 26th, 2026
התחילו בלוחות ביואסה, אחת מוקדמת בצד השמאלי של האגר התזונתי עם Corynebacterium propinquum והשנייה מכילה רק אגר תזונתי.
לאחר מכן, קחו צלחת רב-בארות המכילה תליון סטפילוקוקוס פתוגני.
הנמיך חותמת חיסון לבארות, כאשר קצותיה טובלים בתרבות הסטפילוקוקוס .
סובבו את החותמת, הרימו אותה וודאו שכל קצה נושא טיפה אחידה כדי להבטיח חיסון עקבי.
יישר את החותמת עם הצד הימני של לוח הביואסה, תוך הימנעות ממגע עם המושבות הקיימות.
הסר את החותמת, והשאיר כתמי אינקולום סטפילוקוקוס על האגר.
חזור על ההטבעה על צלחת האגר בלבד כדי ליצור מונוקולטורה. דגור את הלוחות הפוכים.
בקוקולטורה, C. propinquum מפריש סידרופורים, מולקולות קטנות שאוספות ברזל מהאגר, ובכך מעכבות את צמיחת הסטפילוקוקים .
לאחר הדגירה, השוו בין צמיחת סטפילוקוקוס בקו-קולטורה ובמונוקולטורה.
עיכוב משמעותי בקו-קולטורה מרמז על אינטראקציה בין שני המינים.
לאחר דגירה בת שישה ימים של לוח הביואסה, יש להכין תרביות לילה של האורגניזם המטרה כפי שתואר קודם. הכינו את צלחת היעד על ידי מילוי כל באר של צלחת ריקה בת 12 בארות ב-1.8 מיליליטר BHI ו-200 מיקרוליטר מהתרבית המטרית ללילה. הניחו חותמת חיסון סטרילית על צלחת המטרה.
סובבו בעדינות את התרביות סביב הבארות, כדי לוודא שהן לא מזהמות בארות סמוכות. הרימו את חותמת החיסון, וודאו שיש טיפה של תרבית מטרה מדוללת על כל קצה חותמת. הנח את חותמת החיסון על פלטת ביואסיה לא מחוסנת, ונענע בעדינות את הבול כך שטיפה תרבית תחסן כל באר.
לאחר הסרת הבול, טיפה של תרבית צריכה להיות נראית בבארות. אם בארות לא מחוסנות בחותמת החיסון, שימו 3 מיקרוליטר של תרבית מדוללת ללילה על הבארות באמצעות פיפטה. לאחר מכן, הסנן את לוחות הביו-בדיקה כפי שתואר קודם, אך יישר את קצות החותמת עם הצד הימני של פלטת 12 הבארות, כדי להבטיח שהחותמת לא תיגע במושבה החיידקיים הקיימת. הסר בזהירות את החותמת והחזר אותו ללוח היעד.
אם האגר התקשה בבארות בצורה לא אחידה, נענע בעדינות את הבול קדימה ואחורה, אך היזהר לא להזיז את הבול לצמיחת אורגניזם הבדיקה.
חוזרים על החיסון לכל לוח ביואסה עד שכל הלוחות מחוסנים, ואז דגרו את הלוחות הפוך בטמפרטורה המתאימה למשך שבעה ימים.
לאחר שבוע של שילוב בין המבחן לאורגניזם המטרה לבין האורגניזם, דירגו את האינטראקציות בהתבסס על הערכה ויזואלית. לדרג את הבארות עם גידול האורגניזם המטרה שמציג גדילה בלתי ניתנת להבחנה מהמונוקולטורה כאפס. סמן את הבארות עם צמיחה מופחתת כאחד, ואת חוסר הצמיחה כשתיים.