אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:15 דק׳ • March 31st, 2026
התחילו בתרבית חיידקים המשובצת מתחת ללוח אגרוז בקערת זכוכית.
ממברנות תאי החיידקים מסומנות בצבע פלואורסצנטי.
החיידקים גם מהונדסים לבטא RNA אנטיסנס שמכוון ל-mRNA ספציפי, ומעכב ייצור חלבון חיוני לחלוקת תאים.
הוסיפו טיפה של שמן טבילה למטרה של מיקרוסקופ הפלואורסצנציה הפוך.
הניחו את הצלחת בתוך מארז מתכתי וקבעו אותה על שלב המיקרוסקופ.
הרם את המטרה עד שהשמן נוגע בצלחת, ואז התמקד בתאים.
השתמש בתוכנת הדמיה כדי להגדיר ערימות Z ללכידת תמונות בעומקים שונים.
התחל לצלם תמונות טיים-לאפס פלואורסנטיות.
כאשר התאים מגיבים לביטוי ה-RNA האנטיסנס, הם לא מתחלקים ומפתחים צורות נפוחות.
ארגון הממברנה מופרע, מה שמוביל לפלואורסצנציה לא אחידה וממוקדת, שמעידה על חלוקה לקויה של התאים.
כדי לצלם את הדגימה, השתמשו בכפתור המיקוד הגס כדי לוודא שהמטרת מורדת במלואה לפני אתחול המיקרוסקופ בתוך תוכנת המיקרוסקופ. הנח טיפה של שמן בעל מקדם שבירה 1.517 במטרה לטבילה בשמן 100X, והעבר את הצלחת עם תחתית הזכוכית המכילה את הדגימה אל ארון המתכת.
החליק בעדינות את הצלחת לתוך מהדק הבמה, והשתמש בכפתור הכיוון הגס כדי להרים את האובייקטיב עד שהשמן נוגע בתחתית הזכוכית של הצלחת. השתמש בעינית ובכפתור הכיוון העדין כדי למקסם את הדגימה, ועבר למצב מצלמה. בתוכנת ההדמיה בחלון Resolve 3D, בחר בסמל Design/Run Experiment.
תיבת דיאלוג חדשה תופיע בשם Design/Run Exper
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים