צביעת חיסון של מיקרונגעים מלאי חיידקים בחתך רקמת לב של עכבר להדמיה

התחל עם שקופית המכילה חתך רקמת לב קבועה כימית מעכבר שנדבק ב-Streptococcus pneumoniae, חיידק פתוגני.

זיהום זה גורם להיווצרות מיקרונגעים חוץ-תאיים מלאים בחיידקים בתוך שרירי הלב.

שטפו את החלק עם בופר כדי להסיר את הקיבוע שנותרו.

מרחו חומר ניקוי לא-יוני כדי לחדור את ממברנות התאים המארחים.

שטוף שוב כדי להסיר את חומר הכביסה שנותר.

דגרו את החלק עם חומר חוסם כדי לחסום אתרי קישור לא ספציפיים.

שטוף כדי להסיר חומר חוסם לא קשור.

הכנס נוגדן ראשוני שנקשר לפוליסכריד הקפסולרי של החיידק.

שטפו כדי להסיר נוגדנים לא קשורים, ואז מוסיפים נוגדן משני עם סימון פלואורופור ירוק שנקשר לנוגדן הראשוני.

צבע נגד עם צבע גרעיני לסימון גרעיני תא המארח.

שטוף את החלק והתקן אותו באמצעות מדיום הרכבה.

צפו בחתך באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית כדי להמחיש חיידקים מסומנים בתוך המיקרו-נגעים.

באמצעות חתך לב בגודל 5 מיקרון על זכוכית טעונה חיובית, קודם הקפיאו את החלקים, ואז הפשרו אותם ואפשרו להם להתייבש באוויר. תקבע את השקופיות בפורמלין ניטרלי 10% ל-10 דקות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הסר את הקיבע עם שלוש שטיפות ו-PBS למשך חמש דקות בכל שטיפה.

לאחר מכן חדירות את הרקמה עם 0.2% טריטון X-100 ב-PBS למשך 15 דקות. הסר את הדטרגנט עם עוד שלוש שטיפות ב-PBS רגיל. לאחר מכן, חסמי את הרקמה עם 10% סרום עזים ב-PBS למשך שעה. לאחר שטיפה ב-PBS, כסו את