זיהוי מבוסס PCR של פתוגנים המועברים במזון מדגימות זבובים מועשרות

הניחו את תגובת שרשרת הפולימראז או צינורות ה-PCR המכילים טבליות מוכנות ל-PCR הספציפיות לפתוגנים המקוראים במזון על מתקן צינורות PCR מקורר.

כל טבליה כוללת פריימרים ספציפיים למטרה, DNA פולימראז, dNTPs וצבע פלואורסצנטי המשמש בתגובה ל-PCR.

הוסף ליזאט זבובים מועשר המכיל כמות גבוהה של DNA מחיידקים פתוגניים כדי ליצור את תערובת התגובה.

אטום את הצינורות עם פקקי אופטיקה כדי למנוע אידוי.

טעינו את צינורות ה-PCR למחזור התרמי ובצעו ריצות PCR נפרדות באמצעות תוכניות ייחודיות לפתוגן לכל פתוגן.

במהלך PCR, ה-DNA מתפרק, הפריימרים נקשרים לרצף היעד, וההגברה מייצרת DNA דו-גדילי שקושר את הצבע ופולט פלואורסצנציה.

מחזורים חוזרים גורמים להגברה מעריכית של DNA ולהגברת הפלואורסצנציה.

המכשיר עוקב אחרי הפלואורסצנציה בזמן אמת כדי לזהות את נוכחות הפתוגנים המועברים במזון בדגימה.

כדי להתחיל בזיהוי מבוסס PCR, ראשית, קיררו מתקן צינורות PCR על בלוק קירור. לאחר מכן, הניחו את צינורות ה-PCR המתאימות המכילות טבליות מוכנות ל-PCR עבור הפתוגן הנובע במזון הממוקד במחזיק המכשיר.

הסר בזהירות את הפקקים מצינורות ה-PCR באמצעות כלי הניקוי וזרוק אותם. בדוק שכל צינור מכיל טבלית. לאחר מכן, העבר 50 מיקרוליטר של ליזאט לצינורות ה-PCR המתאימים.

חבר קבלים אופטיים חדשים לצינורות ה-PCR באמצעות כלי הכיסוי. לאחר הרכבת התגובות, טעין את צינורות ה-PCR למערכת זיהוי המחזור של ה-PCR. לאחר מכן, הרץ את התוכנית וצפה בתוצאות כפי שמתואר בפרוטוקול היצרן.