אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:03 דק׳ • February 26th, 2026
התחל עם טחול עכבר שנדבק מראש בחיידקים פתוגניים.
הניחו את הטחול במלח קר עם בופר פוספט כדי לשמור על חיוניות חיידקית.
באמצעות הומוגניזטור, יש להומוגן את הטחול כדי לשבש אותו באופן מכני ולשחרר את החיידקים התוך-תאיים אל הבופר.
זה יוצר תלייה חיידקית שמשקפת את העומס החיידקי הכולל בתוך הטחול.
לבצע דילול סדרתי של ההומוגנט כדי להפחית את צפיפות החיידקים בתמיסה לקביעת ספירת חיידקים מדויקת.
לאחר מכן, קחו צלחת אגר תזונתי המחולקת לשני חלקים.
יש לצלחת את אותו דילול חיידקי על כל חלק של לוח האגר כדי לייצר שכפולים.
תן לצלחת להתייבש, ואז להפוך אותה ותדגר. במהלך הדגירה, חיידקים חיים מתרבים ויוצרים מושבות נפרדות.
ספרו את המושבות מכל חלק של הפלטה כדי לחשב את היחידות הממוצעות ליצירת מושבה, או CFUs, שמייצגות את העומס החיידקי הכולל בטחול במהלך ההדבקה.
הטחול נמצא בצינור של 15 מיליליטר המכיל שני מיליליטרים של PBS. לאחר מכן, יש להשתמש בהומוגנייזרים חד-פעמיים בודדים לכל דגימה כדי להרס את הרקמות על הקרח, ולאחר מכן לדילול סדרתי של תערובת הרקמות.
הלח את הדילולים, בכפילות, בצדדים נפרדים של לוח TSA יחיד, ומאפשר לדגימות להתייבש לזמן קצר. לאחר מכן, הפוך את הלוחות ומגדל את הדגימות בחממה סטטית של 37 מעלות צלזיוס במהלך הלילה, תוך ממוצע של מושבות החיידקים משני צידי הצלחת ומכל דילול בבוקר שלמחרת.