JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 1:45 דק' • February 26th, 2026
קחו קריוסקציות רקמות מהצקום, אזור במעי הגס. חלק אחד הוא מעכבר שנדבק רק ב-Clostridioides difficile. החלק השני הוא מעכבר שנדבק יחד ב-C. difficile וב-Enterococcus faecalis.
ברקמה הנדבקת במשותף, E. faecalis מטבוליזם של ארגינין מארח ומשחרר אורניתין. C. difficile סופג את האורניתין הזה, ומקדם ייצור רעלים הקשורים לצמיחה ונזק לרקמות.
כדי לנתח דגימות אלו באמצעות הדמיית MALDI, יש להחיל שכבת תמיסה אחידה של מטריצה.
טען את הסליידס לספקטרומטר מסה MALDI, שם לייזר סורק את הרקמה ומיינן חומצות אמינו דרך המטריצה.
טען את הסליידס לספקטרומטר מסה MALDI, שם לייזר סורק את הרקמה ומיינן חומצות אמינו דרך המטריצה.
היונים המתקבלים מופרדים לפי יחס המסה-מטען שלהם ומזוהים על ידי המכשיר ליצירת מפות מרחביות של התפלגות חומצות האמינו.
הרקמה הנדבקת יחד מציגה רמות ארגינין נמוכות יותר ורמות אורניתין גבוהות יותר מהדגימה המונונגקטית, מה שתומך בפתוגנזה של C. difficile המונעת על ידי שיתוף פעולה מיקרוביאלי.
בצע את יישום מטריצת MALDI ואת ספקטרומטריית המסה של MALDI כפי שהודגם קודם.
ניתחו את תמונות היונים ממספר שכפולים ביולוגיים, והשוו את התוצאות למובהק באמצעות השוואות קופסאות עוצמה באמצעות תוכנת הסטטיסטיקה SCiLS.