אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:57 דק׳ • February 26th, 2026
התחילו בתרבית של Bacillus subtilis, חיידק קרקע, שגדל במדיום עשיר בחומרים מזינים.
צנטריפוגה לפלט את החיידקים, משליכים את הסופרנאנט, ואז מחזירים את הכדור לתווך מוגדר כימית התומך ביצירת ביופילם.
מדדו את הצפיפות האופטית של התרבית כדי לקבוע את ריכוז החיידקים המתאים.
הוסיפו את התרבית לבארות המכילות מדיום מוגדר לביקורת ומדיום מוגדר עם מעכב לבדיקה.
לדגר בתנאים סטטיים. החיידקים נודדים כלפי מעלה ומצטברים בממשק האוויר-נוזל, שם זמינות החמצן המוגברת תומכת בצמיחת חיידקים.
בבאר הבקרה, החיידקים במשקיע מפרישים רכיבי מטריצה חוץ-תאית ויוצרים ביופילם צף הנקרא פליקל, שכבת הגנה שמקדמת את הישרדות החיידקים.
בבאר הבדיקה, המעכב משבש את סינתזת המטריצה, וגורם לפיזור אוכלוסיות חיידקים.
בדיקה זו מראה כי מעכבים חוסמים היווצרות ביופילם, שהיא תכונה מרכזית של פתוגנזה חיידקית.
ראשית, בחר מושבה אחת מתאימה והעבר אותה ל-3 מיליליטר של מרק LB. הניחו את תרבית ההתחלה בתנור רועד למשך 4 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה, קחו 1.5 מיליליטר מתרבית ההתחלה והצנטריפוגה למשך ארבע דקות.
הסר בזהירות את הסופרנאנט, ואז תלה את הכדור מחדש ב-1.5 מיליליטר MSgg מדיום. כדי לגדל פליקלים, יש להכין לוח תרבית תאים של 12 בארות על ידי הוספת 3 מיליליטר MSgg לכל באר. לחלק מהבארות הללו, הוסיפו MSgg עם מעכב מולקולה קטן בטווח ריכוזים, שמפיץ את מיקום הריכוזים השונים סביב הצלחת, כדי למנוע השפעות קצה.
מדדו את הצפיפות האופטית ב-600 ננומטר של תרבית ההתחלה שהושתה מחדש. התרבות צריכה להיות בין 0.6 ל-1. זה קריטי לעמידות המערכת.
החסן כל באר של צלחת התרבית ב-3 מיקרוליטרים של תרבית ההתחלה שהושעה מחדש. לאחר מכן, דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 23 מעלות צלזיוס למשך שלושה ימים בתנאים סטטיים. לאחר מכן, הוציאו את הצלחת מהאינקובטור וצפו בפליקלים.