הכנת מושבות ביופילם חיידקיות לניתוח מורפולוגי

התחל עם מושבות ביופילם חיידקים שגודלו על צלחת אגר תזונתית.

ביופילמים אלו מורכבים ממטריצה חוץ-תאית הידרופובית שמגנה על החיידקים המכוסים מתגובות חיסוניות של המארח.

הוסף מקבע וסובב בעדינות את הפלטה עד שהביופילם מתחיל לצוף.

אוטם את הפלטה ודגר בעדינות כדי לשמור על מבנה הביופילם.

הסר את הקיבע, הוסיף בופר, ודוגר כדי לייצב את מבנה הביופילם.

באמצעות פיפטת פסטר, נתק בעדינות את המושבה מהאגר.

הוסיפו ריכוזים הולכים וגדלים של אתנול לייבוש מושבות החיידקים.

העבר מושבה צפה על נייר סינון ספוג באתנול וייבש באוויר בתא סגור.

התקן מושבות מיובשות על גשר מצופה סרט פחמן וגשר עם סרט פחמן כדי למנוע טעינה על ידי קרן אלקטרונים.

לאחר מכן, ציפו את הביופילם בשכבת מתכת מוליכה כדי לשפר את ניגודיות ההדמיה.

הביופילם מוכן כעת לניתוח מורפולוגי באמצעות מיקרוסקופ אלקטרוני.

כדי להתחיל בקיבוע דגימה, יש להכין תחילה מספיק תמיסה מקביעה טרייה למספר הרצוי של מושבות ביופילם. הוסיפו בזהירות 5 מיליליטר של קיבוע לכל צלחת פטרי, והימנעו מפיפטינג ישיר על מושבות. המושבות יתחילו להתנתק מהאגר ולצוף.

אטום בזהירות את הלוחות עם פרפילם, ודוגר על שייקר סיבובי למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. העבירו את הצלחות לאחסון של 4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה.

הסר בעדינות את הנוזל המקבע עם פיפט פסטר, שמחובר לשואב אבק.

הוסיפו 10 מיליליטר של 100 ננומולר סודיום קקודילאט, בופר סי