שיטת זכוכית כיסוי תאית להיווצרות ביופילם חיידקי במבחנה

קחו תרבית של חיידקים יוצרים ביופילם שגדלו במדיה עשירה בחומרים מזינים.

מדלל את התרבית במדיום טרי ודגר עם ניעור כדי לעודד צמיחת חיידקים עד שמגיעים לריכוז הרצוי.

לאחר מכן, הוסיפו את התרבית למדיה טרייה המועשרת בסינוני ליחה שמקורם בחולים בסיסטיק פיברוזיס.

הסינון הזה מכיל גורמים שמקורם במארח שמכינים את החיידקים להיווצרות ביופילם.

מזרים את המתלה המוכן לבארות של זכוכית כיסוי עם תא ודגור סטטית כדי לאפשר לחיידקים להיצמד לפני הזכוכית.

לאחר הדגירה, יש להסיר את המדיום ולשטוף בעדינות את הבארות עם מדיום טרי כדי להיפטר מחיידקים שאינו דבקים.

הוסיפו חומר טרי המכיל סינון ליחה לבארות ושוב דגרו את החדר באופן סטטי.

במהלך הדגירה, גורמים שמקורם במארח במדיה מפעילים מסלולי איתות חיידקיים שמפעילים ייצור מטריצות חוץ-תאיות ומקדמים התפתחות ביופילם מובנית.

הביופילם מוכן כעת לניתוח נוסף.

הניחו 40 מיקרוליטר של תרבית מוכנה מראש לתוך 4 מיליליטר של מרק לוריה טרי, או LB, וגדלו את החיידקים כדי לקבל תרבית בצפיפות אופטית של 0.55 ב-600 ננומטר.

לאחר מכן, דילל 100 מיקרוליטר של תרבית 0.5 OD לתוך 400 מיקרוליטר של סינון ליחה מוכנים של 10% ב-LB. השתמש ב-200 מיקרוליטר של הדילול כדי לזרוע את הבארות של תאי השקופה.

אפשר לחיידק להידבק במשך ארבע שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מבלי לרעוד.

לאחר ארבע שעות, הסר את המדיה ושוטף בעדינות את הביופילם