אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:32 דק׳ • February 26th, 2026
דגרו זכוכית כיסוי תאית המכילה חיידקים דבוקים במדיום בתוספת סינון ליחה שמקורו בחולה סיסטיק פיברוזיס ובמדיה בלבד.
סינון הליחה מכיל רכיבים שמקורם במארח המעודדים מסלולי איתות חיידקיים, וגורמים ליצירת מטריצות ויצירת ביופילם.
לאחר שהביופילמים נוצרו, יש להשליך את המדיום המכיל חיידקים צפים חופשיים ורכיבים שאריתיים שמקורם במארח.
שטוף עם בופר כדי להסיר חיידקים שמחוברים ברפיון.
הוסיפו תערובת צביעה המכילה צבעים פלואורסצנטיים חדירים לממברנה ובלתי חדירים לממברנה, ודגרו בחושך.
הצבע החדיר לממברנה חוצה ממברנות שלמות, ומסמן גם חיידקים חיים וגם לא חיים. לעומת זאת, הצבע הבלתי חדיר נכנס רק לממברנות פגועות, ומסמן באופן סלקטיבי חיידקים לא חיים.
לאחר הדגירה, הסר את תמיסת הכתם ושוטף עם הבופר כדי להסיר צבע עודף ולהפחית את הפלואורסצנציה ברקע.
הוסף מדיום טרי וצלם תמונות באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית.
ביופילמים שגדלו עם סינון ליחה מציגים עובי מוגבר, מה שמדגיש את תפקידם של רכיבים שמקורם במארח ביצירת ביופילם.
לאחר הצמיחה, יש להסיר את המדיה מבארות התא ולשטוף בעדינות כל תא פעמיים עם 300 מיקרוליטר של PBS סטרילי.
לאחר מכן, להכנת תערובת הצביעה בביופילם, הוסף 1 מיקרוליטר מכל צבע שסופק בערכת החיות לכל מיליליטר תמיסה נדרשת, וערבב את התמיסה.
הכמות האופטימלית של צבע וזמן צביעה נקבעת אמפירית לכל אורגניזם.
הוסיפו 200 מיקרוליטר מתערובת הצביעה לכל באר בזכוכית הכיסוי המקובלת. דגור את זכוכית הכיסוי.
לאחר הדגירה, הסר את תערובת הצביעה מהתאים ושוטף כל באר עם 300 מיקרוליטר של PBS סטרילי.
החלף את ה-PBS במדיה טרייה. לבסוף, יש להמשיך בהדמיה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית.