הכנת דגימה והדמיה של חיידקים מסומנים פלואורסצנטית

התחילו עם מגלשית זכוכית גדולה עם שקופיות זכוכית קטנות יותר הממוקמות בכל קצוות בשכבה כפולה.

שפוך אגרוז מותך לחלל וכסו אותו במגלשה זכוכית גדולה נוספת.

קרר את ההתקנה כדי להקשות את האגרוז.

הסר את מחסניות הזכוכית וחתוך את האגרוז לרפידות קטנות.

הניחו את כריות האגרוזות בתוך מסגרת דבק שמחוברת למחסנית.

קחו תרבית של חיידקים פתוגניים, שעברו שינוי גנטי לביטוי מערכת הפרשה מסומנת פלואורסצנטית, החיונית לזיהום המארח.

השתמש בכתם חיידקי צפוף ותשהה אותו במים.

מערבולות כדי לפזר את החיידקים באופן אחיד.

מרחים את השעון על כרית האגרוז כדי לייצב את החיידקים.

אטום עם כיסוי לשמירה על הידרציה.

תחת תאורת שדות בהירים, בחרו שדה תאים להדמיה.

אופטימיזציה של הגדרות מיקרוסקופ להפחתת הלבנת פוטו-ליצירה ולהגביר את רגישות האות.

עבור לתעלה הפלואורסצנצית כדי לזהות את החיידקים המסומנים בפלואורסצנטית.

התחילו בהכנת פדים של אגרוזות להדמיית תאים חיים. הכינו כ-30 מיליליטר של תמיסת אגרוז 1% נמס במים וחממו במיקרוגל בבקבוק זכוכית למשך כ-90 שניות, תוך ערבוב מדי פעם עד שהאגרוז נמס לחלוטין.

הניחו שתי שקופיות זכוכית בגודל 22 על 22 על 0.15 מילימטרים על שפת זכוכית בגודל 25 על 75 על 1.1 מילימטר, אחת מעל השנייה. אחר כך, ערמו עוד שתי מגלשות קטנות בקצה השני. פיפט של כ-1 מיליליטר מהאגרוז המותך אל הסלייד המרכזי בין שתי המגלשות העליונות של הזכוכית ומניח מגלש גדול נוסף מעל האגרוז המותך, תוך שמירה על הימנעות מהיווצרות בועות אוויר.

קיררו את הסליידס בארבע מעלות צלזיוס למשך 15 דקות, ואז השתמשו בסקלפל או להב גילוח כדי לחתוך בעדינות את הכרית לריבועים קטנים. מקבע מסגרת דבק דו-צדדית על סלייד זכוכית בגודל 25 על 75 על 1.1 מילימטר והנח כמה רפידות על הסלייד. המיס כתם כבד של Legionella pneumophila ב-1 מיליליטר של מים מזוקקים כפול.

אחר כך מערבולת, ופיפטה של 2 עד 3 מיקרוליטרים מהדילול על הפדים. הנח בעדינות כיסוי בגודל 58 על 24 על 0.15 מילימטר על מסגרת הדבק. בחר תאים להדמיה באמצעות תאורה בשדה בהיר.

לאחר מכן, בחלון הלכידה של תוכנת המיקרוסקופ, כוון את ה-ND ל-180 ואת ה-binning ל-2 על 2. השתמש בערוץ 488 ננומטר לחשיפת הדגימה למשך 500 עד 1000 מילישניות ולאמת את הספציפיות של הפלואורסצנציה על ידי הדמיית Legionella pneumophila לא מתויגת עם אותם פרמטרים.