אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:08 דק׳ • March 31st, 2026
התחילו בעכבר שמערכת העיכול שלו מושבתת על ידי Clostridium difficile, פתוגן חיידקי אנאירובי שיוצר נבגים.
הרסן את העכבר ואפשר לו להפריש באופן טבעי לתוך צינור סטרילי שנשקל מראש.
קבעו את המשקל הנקי של דגימת הצואה על ידי הפחתת משקל הצינור הריק מהמשקל הכולל להכנת דילול מתאים.
העבר את הדגימה לסביבה אנאירובית כדי לשמור על חיוניות החיידק הרגיש לחמצן.
הוסיפו בופר לדגימה והפרעו אותה מכנית כדי לשחרר את תכולתה לתלוי.
הדגירה כדי לאפשר לשאריות גדולות יותר לשקוע ולשמר תאי חיידק ונבגים בסופרנטנט.
בצע דילול סדרי של הסופרנטנט בבופר.
ציפוי את הדילול על מדיום סלקטיבי ודגר בתנאים אנאירוביים.
המדיום מקדם נביטה של נבגים וצמיחה סלקטיבית של Clostridium difficile תוך עיכוב חיידקים מתחרים, מה שמוביל למושבות מובחנות.
ספירת המושבות כדי לכמת את עומס ה-Clostridium difficile בצואה ולהעריך את ההתיישבות במערכת העיכול.
כדי לאסוף דגימות צואה מעכברים להערכה, תחילה יש לרסן את העכבר הנבדק בעור הרפוי בצוואר ובגב, כדי לוודא שהחיה אינה במצוקה.
בעזרת האצבע הקטנה, הרם בעדינות את זנב החיה, חושף את פי הטבעת הטבעת. החזק צינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי במשקל ידוע ישירות מתחת לפי הטבעת של בעל הטבעת, כדי לוודא שהצינור לא נוגע ישירות בעכבר. כאשר החיה מתפרשת, אספו את הכדור הצואתי בצינור.
אחסן את הצינור בטמפרטורת החדר עד שכל הדגימות הנדרשות ייאספו. שקלו את הצינורות המכילות צואה בסולם אנליטי ורשמו את המסה לארבע ספרות עשרוניות. חשב את משקל כדור הצואה על ידי חיסור משקל הצינור.
לאחר מכן, חשב דילול של אחד עד עשר של התכולה ומרחיב מחדש ל-1x PBS. השתמש בקצה הפיפטה כדי לשבש בעדינות את הצואה לתמיסה. דגרו את הדגימות בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות, כדי לאפשר לתכולה לשקוע.
שמירה על התמיסות אנאירובית, מבצעים דילול סדרתי לכל דגימה ב-1x PBS. העבר 100 מיקרוליטר מכל דילול סדרתי על לוחות TCCFA. השתמש במפזר סטרילי בצורת L ומרח את המדיה באופן שווה על הלוחות.
דגרו את הלוחות בתנאים אנאירוביים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לבסוף, יש למנות את מושבות C. difficile ולחשב את יחידת יצירת המושבה לכל גרם של תכולת צואה.