חיסון פתוגן חיידקי לעלים של ארבידופסיס באמצעות חדירת ואקום

קחו תרבית חיידקים שיכולה להדביק רקמת עלים.

גרד את המושבות ותשהה בתמיסת מלח.

מדדו את צפיפות האופט כדי להעריך את ריכוז החיידקים, ואז מדללים ל-OD הרצוי.

בצע דילול סדרתי כדי להגיע לריכוז החיסון הסופי.

הוסף חומר פעיל כדי להפחית את מתח הפנים ולהבטיח התפשטות אחידה של חיידקים על העלה.

העבר את המתלה לצלחת פטרי.

לאחר מכן, מניחים שני מקלות עץ על ראש סיר ערבידופסיס .

הפוך את הצמח מעל הצלחת, טובל את העלים בתלוי.

הנח את המערכת בתא ואקום והפעיל פולס ואקום

הוואקום המופעל מסיר אוויר מרקמת העלה דרך פתחים טבעיים.

שחרור הוואקום מחזיר את הלחץ האטמוספרי, ודוחף חיידקים להיכנס לעלים.

חזור על הפולסים כדי להשיג חדירה מקסימלית.

הסר את הסיר. ואז למרוח את החיסון העודף.

עלי האראבידופסיס הנגועים בחיידקים מוכנים לניתוח במורד הזרם.

הוציא את מלאי הגליצרול של זן Pseudomonas syringae המעניין מ-80 מעלות צלזיוס מינוס לפלטה LB בתוספת אנטיביוטיקה מתאימה. דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס למשך 40 עד 48 שעות. גרדו את הביומסה החיידקית והחזירו אותה לחמישה מיליליטר של מגנזיום כלוריד של 10 מילימולר.

מדוד את הצפיפות האופטית ב-600 ננומטר ומכוון אותה ל-0.1 על ידי הוספת כלוריד מגנזיום של 10 מילימולר. בצע דילול סדרתי בכלוריד מגנזיום של 10 מילימולר כדי לקבל ריכוז סופי של 5 פעמים 10 ל-5 CFU למיליליטר. לאחר מכן, הכינו 200 מיליליטר של אינוקולום לצמחי הארבידופסיס ו-50 מיליליטר לצמחי השעועית.

לפני החיסון, מוסיפים את הסורפקטנט סילווט L-77 לריכוז סופי של 0.02% לחיסון שעועית ו-0.01% לערבידופסיס. לחדירת ארבידופסיס , מניחים שני מקלות עץ היוצרים X מעל הסיר והניחו את הסיר פונה כלפי מטה מעל צלחת פטרי בקוטר 14 סנטימטרים המכילה 200 מיליליטר של חירון. לצורך חיסון עלי השעועית, הכנס את הצמחים ואת תמיסת החיסון לתא ואקום והכנס את העלה לצינור צנטריפוגה קוני בנפח 50 מיליליטר המכיל את החירון.

תן פולס של 500 מיליבר למשך 30 שניות כדי לחדור לעלים. רוקן את תמיסת החיסון העודפת עם פיסת נייר, והחזיר את הצמחים לתא הצמיחה המתאים להם.