JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:32 דק' • March 31st, 2026
נתחיל עם שתילי Arabidopsis thaliana שגדלו על תמיכות רשת בצפיפות נמוכה שצפות על פני השטח של מדיום נוזלי במערכת ללא קרקע.
שתילים אלו חוסנו מראש בחיידקים המתיישבים על השורש ויוצרים ביופילם.
החזק את הנבט, וצבוט בעדינות את הגבעול שמתחת לעלים עם מלקחיים.
לאחר מכן, להרים את השתיל מהרשת מבלי לפגוע בשורש, תוך שמירה על מבנה השורש המושב.
העבר את השתיל לפלטה רב-בארית המכילה מים מזוקקים כפולים.
כסו את הפלטה בנייר אלומיניום וסוניקה את הדגימות באמצעות סוניקטור רב-שיניים כדי לשבש את הביופילם ולהוציא חיידקים מפני השורש.
לאחר הסוניקציה, השתמשו במתלה החיידקי הסוניקני להכנת דילול סדרתי.
הצלח את הדגימות המדוללות על לוחות אגר והוסיף חרוזי זכוכית כדי לפזר את החיידקים באופן שווה.
הסר את החרוזים ודוגר את הצלחות כדי לאפשר לחיידקים חיים ליצור מושבות.
היווצרות מושבה מאשרת התיישבות מוצלחת של שורשים על ידי חיידקים במערכת חסרת קרקע.
לאחר השטיפה, הסר את השתילים מהרשת על ידי הנחת מלקחיים מחוטאים בעדינות מתחת לעלים בצד העלים של הרשת. צבוט בעדינות את הגבעול, והזיז את השתילים כלפי מעלה והרחק מהרשת כדי לשחרר את השורש מבלי לשבור אותו. כדי להסיר חיידקים משורשי הצמחים, העבירו שתילים מכל רשת לבארות נפרדות בפלטת סוניקציה בת 24 בארות המכילה מיליליטר אחד של מים מזוקקים כפול.
סוניקט את כל הדגימות בתוך הלוח בבת אחת, באמצעות סוניקטור רב-שיניים כפי שמתואר בכתב היד. כדי לכמת את החיידקים, יש לבצע דילול סדרתי של 10 פעמים של דגימות סוניקיות במדיום גידול חיידקים. מרחו באמצעות חרוזי זכוכית סטריליים, ודגרו בטמפרטורה האופטימלית לחיידקים עד שקולוניות בודדות יהיו ניתנות לספירה.