אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:00 דק׳ • March 31st, 2026
התחל בתאים ציאנובטריאליים קבועים, מקובעים וחדירים, המודבקים ל-coverslip.
תאים ציאנובטריאליים אלו מבטאים חלבונים מווסתים צמיחה בעלי שכיח נמוך.
במהלך הדמיית פלואורסצנציה ברזולוציה גבוהה, פיגמנטים טבעיים רגישים לאור בתוך תאי הציאנובקטריאליים פולטים פלואורסצנציה ברקע.
דבר זה מפחית את איכות התמונה בעת הצגת חלבונים בעלי שכיחות נמוכה.
כדי למזער את הפלואורסצנציה הרקעית הזו, מניחים את הכיסוי המכיל את תאי הציאנובקטריאליים בצלחת צביעה.
הוסיפו בופר חוסם המכיל חלבוני סרום למניעת קישור נוגדנים לא ספציפיים במהלך עיבוד בהמשך הזרם ודטרגנט לשמירה על חדירות התא.
הנח את תבנית הצביעה על קרח וחשוף את התאים לאור זנון עז.
האור בעוצמה גבוהה מפעיל את הפוטו-הלבנה, ומפרק פיגמנטים רגישים לאור, בעוד חלבונים המווסתים בצמיחה בעלי שפע נמוך נשארים ללא פגע.
תנאי קור מפחיתים נזק שנגרם מחום ושומרים על שלמות התא.
תהליך זה מאפשר הדמיה ברורה של חלבונים בעלי שפע נמוך ומווסת גדילה באמצעות צביעת חיסון במיקרוסקופיה פלואורסצנציונית ברזולוציה גבוהה.
העבר את הכיסוי השטוף לכלי הצביעה.
הוסיפו 50 מיקרוליטר של בופר חוסם על גבי הכיסוי. מניחים את כל תבנית הצביעה על קרח ואז העבירו אותה מתחת למקור האור של הזנון לפוטובלינינג למשך לפחות 60 דקות. לאחר הלבנת הפוטו וחסימה, השתמשו בקצה מגבת נייר כדי להסיר את בופר החסימה.