הקמת זיהום חיידקי בזחלי דרוזופילה

קחו טיפה של פתוגן חיידקי על שכבת פרפין.

שים זחל דרוזופילה בטיפה החיידקית.

מתחת למיקרוסקופ סטריאומיקרוסקופ, השתמש במחט טונגסטן כדי לדקור את הזחל ולנקב את הקוטיקולה, את השכבה החיצונית המגנה ואת האפידרמיס שמתחת.

דבר זה מאפשר כניסה לחיידקים אל ההמולימפה של הזחל, הנוזל המחזורי.

העבר את הזחלים הנגועים לפלטת אגר מחורצת, עשירה בחומרים מזינים, המכילה משחת שמרים כמקור מזון.

החריצים מקלים על נדידת הזחלים ומונעים התייבשות.

הוסיפו את שארית המתלים החיידקיים ללוח ואטמו אותה עם שכבת פרפין.

דגרו את הפלטה בתא לח כדי לשמור על חיוניות הזחלים.

בתוך ההמולימפה הזחלית, תאי חיסון הנקראים המוציטים מזהים את החיידקים ומתחילים את הפגוציטוזיס.

בעוד שחלק מהחיידקים מושמדים לאחר מיזוג בין פגוזום לליזוזום, אחרים שורדים על ידי עיכוב המיזוג או התנגדות למתח תוך-תאי ומשכפלים בתוך המוציטים, מה שמוביל לזיהום תוך-תאי מתמשך.

הדרוזופילה לארווההנגועים מוכנים כעת למחקרי אינטראקציה בין מארח לפתוגן.

הנח משחת שמרים על צלחת אגר מיץ ענבים. עשו חיתוך דק באגר, שם הזחלים יכולים לנדוד כדי למנוע ייבוש.

הרכיבו מחט טונגסטן מחודדת בקוטר 0.001 מ"מ עם מלקחיים מחזיקים באמצעות סרט פרפין. פיפט 50 מיקרוליטר של C עם טיטר גבוה, מבטא mCherry. בורנטי על שכבת הפרפין תחת מיקרוסקופ סטריאו, ומניחים את הזחלים בבריכת החיידקים. דקור את הזחלים עם מחט טונגסטן.

העבר את הזחלים לפלטת אגר. העבר את המדיום הפתוגן שנותר אל לוח האגר, ואטום את הפלטה עם שכבת פרפין. השאר את הזחלים על הצלחת באוויר לח עד הזמן הרצוי לאחר ההדבקה. עזוב את ה-C. זחלים של בורנטי הדביקו את הצלחת במשך 24 שעות.