Name: באוטם שריר הלב אצל חולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-16T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: למדו כיצד ליצור מודל של אוטם שריר הלב אצל חולדות לחקר מנגנוני אישמיה וריפרפוזיה. השיטה כוללת קשירת עורק LAD למשך 30 דקות והערכת גודל האינפארקט והאזור בסיכון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

BKM נתמך על ידי המכון הלאומי לבריאות (NIH) / הלאומי ללב ריאות ודם המכון (NHLBI) מענק (R01-HL085487). MH הוא נתמך על ידי איגוד הלב האמריקאי הלאומי (AHA) המדען פיתוח גרנט (SDG) והחברה לקרדיולוגיה הגריאטרי.

1. הכנת שטח ההפעלה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשטח הפעלה מוכנה לראשונה על ידי חיטוי האזור עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל מכשירי ניתוח יש לעבור עיקור עם מעקר חרוז חם לפני הניתוח (ובין ניתוחים עכברוש בודדים). מכשירים אלה כוללים: מספריים כירורגיות (2), מלקחיים (1), מלקחיים מעוקל (1), מחזיק מחט (2), וכן rectractor החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזה כותנה applicators הם להיות זמין על מנת לנהל את הדימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוונו את הטמפרטורה של מערכת שמיכה homeothermic (כרית חימום), כדי לשמש כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של בעל החיים ב 37 ± 1 ° C, על מנת למנוע נפילה דרמטית טמפרטורת הגוף, את גודל האוטם תלוי משך חסימה כמו טמפרטורת הגוף היטב (Tarnavski et al.). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ההרדמה, כל חיה יקבלו מינון של עצירות (0.1-2.5 מ"ג / ק"ג SQ) ו carprofen טבליות דרך הפה (Rimadyl, Bioserv הלוח: 1 טבלית) יום לפני הניתוח. באותו זמן מיד לפני הניתוח, כל חיה יהיה שוב לקבל מינון של עצירות (0.1-2.5 מ"ג / ק"ג SQ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערה: מחקרים שכללו הערכת תפקוד הלב שיפוץ הלב על פני תקופה של זמן (7 - עד 28 ימים מעבר), מינון של עצירות (0.1-2.5 מ"ג / ק"ג SQ) תנוהל, כל 6 שעות לאחר ניתוח לניתוח שעות 24-48 פירסום טבליות אוראלי carprofen יינתן פעם ביום (ראה "שלאחר הניתוח לשחזור"). </li></ol> 2. הכנה אינטובציה של חולדות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני אינדוקציה של הרדמה, חיות תיבחן לזהות קיימים תנאים שעשויים לסבך תוצאה ניתוחית, בדיקה גופנית תכלול בדיקה ויזואלית ומדידה של קצב הלב, קצב הנשימה, טמפרטורת הגוף ומשקל הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם החיות נחושים להיות בריאים, חולדות זכרים 250-300 גרם (לדוגמא ספראג Dawley) יהיה משקלו ומאפיינים מזהים יתועדו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות הן מכן הרדים עם 80 מ"ג / ק"ג של pentobarbital; את רמת הנכונות של הרדמה מאומת באמצעות תגובת נסיגה איבר על ידי הפעלת לחץ של המיטה עכברוש מסמר (הבוהן קמצוץ רפלקס) ומדי פעם לאורך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עצירות (0.1-2.5 מ"ג / ק"ג; SQ) תנוהל בזמן הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכונת גילוח חשמלית משמש אז לגלח את הטופס פרווה האזורים הצוואר והחזה. הערה: מחקרים שכללו הערכת תפקוד הלב שיפוץ הלב על פני תקופה של זמן (7 - עד 28 ימים מעבר), פרווה חייב להיות מגולח לחלוטין מהאזור כירורגית כדי לשמור על סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האזורים מגולח יש לקרצף ולחטא עם פתרון בבטאדין ואחריו לנגב את האזור עם אלכוהול 70%; זה בבטאדין ושיחים אלכוהול לחיטוי ההליך היא תחזור על עצמה שלוש פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיה הרדים ממוקם אז על מערכת שמיכה homeothermic (כרית חימום) במצב פרקדן על מנת לשמור על טמפרטורת הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטובציה Endotracheal מבוצע אז קודם כל בזהירות לחשוף את קנה הנשימה, על מנת לשפר להדמיה של אינטובציה, על ידי ביצוע 5 מ"מ אמצע הצוואר חתך לבין הפתיחה של רקמת השריר, בדיוק מעל קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה מאפשר ראיה טובה יותר עבור החדרת הצינור endotracheal (גודל פוליאתילן 90; PE 90) שבו הוא צינורות משופעים על קצה על מנת להקל על הכניסה דרך הגרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינור endotracheal מוכנס לתוך קנה הנשימה, עם להדמיה שנעזר באמצעות מיקרוסקופ סטריאו כירורגית, על ידי מניפולציה של הלשון בזהירות בעת הצגת קנה הנשימה לבין הכניסה של הצינור endotracheal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוורור מכני מושגת לאחר מכן על ידי חיבור צינור endotracheal כדי קנט מדעי ההנשמה (Dual Mode Topo) רכיבה על 80 נשימות לדקה נפח אדיר של 1.2 מ"ל לכל משקל גוף 100 גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעטוף סטרילי ממוקם אז על החולדה, ומשאיר רק את אזור הניתוח נחשף, ובכך לצמצם אפשרות של זיהום במהלך המבצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המנתח ועוזריו הם בעלי חיים ללבוש מסכה, חלוק, כפפות, עם כפפות להיות שונה בין הניתוחים עכברוש בודדים. </li></ol> 3. חלוף השמאל Anterior העורקים יורד (LAD) קשירת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר נשימה יציב נוצר, החזה נפתח בחלל השמאלי צלעי הרביעי, באמצעות hemostats או מספריים סוף הסיבוב כדי לפתוח את החלל, אבל בלי חיתוך הרקמה, כך הסיכון של דימום יכול להיות מופחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מפשק החזה ממוקם אז בתוך המרחב צלעי הרביעי; כדי להפיץ את הצלעות, כך החדר השמאלי (LV) חשוף, מטפלת מירבית לא לפגוע הריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קרום הלב נפתח, אבל נשאר במקומו, אם אפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קדמי פרוקסימלי השמאל יורד (LAD) עורק יזוהו (איור 1), עם שימוש של כמיקרוסקופ סטריאו urgical, ואת LAD לאחר מכן ligated transiently (או יכול להיות קשור עם Slipknot) באמצעות תפר 6-0 prolene לתקופת 30 דקות איסכמי (איור 1), אך ללא החצנה של הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאפשר reperfusion לב, מספריים microsurgical משמשים לחתוך את הקשר של המיתר (או על ידי שחרור Slipknot), שנעשו על ידי 6-0 prolene תפר, 30 דקות לאחר קשירת של הנער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחולדות דמה שליטה, ההליך הוא זהה, למעט LAD לא ligated transiently. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצוא הוא אז בקצרה (1-2 שניות) את צבט מונשם כדי לאפשר מחדש האינפלציה של הריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מפשק חזה מוסר אז הצלעות נמשכים זה לזה באמצעות תפר 2-0 prolene עם דפוס תפר קטע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר בצלעות סגורות, יצוא של מכונת ההנשמה הוא שוב בקצרה (1-2 שניות) כדי להבטיח את צבט נשימה נכונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העור הוא נסגר באמצעות תפרים 6-0 prolene עם דפוס תפר מתמשך. </li></ol> 4. אישור של קשירת מוצלחת של העורק LAD <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קשירת נכונה של הנער יאושר על ידי התבוננות הלבנה של רקמת שריר הלב דיסטלי אל תפר, כמו גם תפקוד לקוי של הקיר הקדמי, כפי שנצפה במהלך קשירת LAD חולף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Reperfusion יאומת על ידי שובו של הצבע האדום לרקמת שריר הלב לבין הפגנה של התאוששות מסוימת של תנועה הקיר הקדמי, כפי שנצפו מיד לאחר קשירת LAD חולף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערה: מחקרים שכללו הערכת תפקוד הלב שיפוץ הלב על פני תקופה של זמן (7 - עד 28 ימים מעבר), echocardiogram יבוצעו 24 שעות LAD קשירת לפרסם, על מנת לקבוע את מידת המושרה אוטם שריר הלב. כל החיות עם קיצור החדר השמאלי השבר (LV FS) &lt;20%, כפי שנקבע בין echocardiogram, כמו גם תפקוד לקוי של הקיר הקדמי ההצעה עולה בקנה אחד עם האוטם, יהיה מזוהה המשמש למעקב תפקוד הלב מחקרים שיפוץ. שאם חולדות בקרה צפויים להיות נורמלי LV FS בין 40-45% (דל מונטה ואח'). </li></ol> 5. לאחר ניתוח שחזור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הניתוח הושלם, לעטוף הסטרילי מעל החיה יוסרו. טמפרטורת הגוף (באמצעות מדחום רקטלי), קצב הנשימה (על ידי בדיקה חזותית), קצב הלב (על ידי רטט), וכן סימנים חריגים של כאב להיות במעקב עד החיה הופך אמבולטורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החולדה יוסר ההנשמה ואחר כך להציב בכלוב חיה ואיפשר להתאושש מן ההרדמה. בכלוב הזה, קצה אחד של הכלוב יהיה מחומם על ידי כרית חימום כדי לאפשר החולדה לחפש חום. כמו כן, המים יהיו זמינים עכברוש בתקופה זו תצפית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם סימני התייבשות הם נצפו לאחר הניתוח, 0.5 מ"ל של תמיסת מלח סטרילית יהיה להזריק intraperitoneally (IP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עצירות (0.1-2.5 מ"ג / ק"ג; SQ) אז יהיה להינתן מיד לאחר הניתוח ובמהלך ההחלמה שלאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערה: מחקרים שכללו הערכת תפקוד הלב שיפוץ הלב על פני תקופה של זמן (7 - עד 28 ימים מעבר), מינון של עצירות (0.1-2.5 מ"ג / ק"ג SQ) תנוהל, כל 6 שעות לאחר ניתוח לניתוח שלאחר 24-48 שעות. טבליות Carprofen אוראלי (Rimadyl, Bioserv לוח) יהיה גם בתנאי (1-גלולה יומית) לניתוח לפחות 48 שעות שלאחר. </li></ol> 6. הערכה היסטולוגית של reperfusion איסכמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השלמת תקופת 4 שעות reperfusion, חולדות יש מרדים שוב עם 80 מ"ג / ק"ג של pentobarbital ואת LAD הוא ligated שוב (או Slipknot ניתן וקשר) (הואנג ואח' ו קייזר ואח'). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 מ"ל של בלו 5% אוואן (ב פוספט שנאגרו מלוחים) מוזרק מכן לתוך החדר החדר הימני מותר perfuse במשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר של 2 דקות, 1 מ"ל של תמיסת אשלגן כלורי רוויים מוזרק מכן כדי לעצור את הלב מהמכות החדרה חדרית זכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הלב הוא אז נכרת במהירות, מוטבע 2% agarose פוספט שנאגרו מלוחים, ואת מחולק אז 1-2 פרוסות מ"מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שריר הלב קיימא הוא מוכתם אז במשך 20 דקות ותמונות של כל פרוסה עם כלוריד 2% tetrazolium triphenyl (TTC) הוא נתפס. התמונות הן לכמת אז על מנת לזהות את כמות שטח שריר הלב: (1) שאינו בסיכון (סעיפים כחול), (2) אזור בסיכון (AAR: אדום וחתכים לבן), ו - (3 ) באזור זה infarcted (לבן "בלא כתם" חלקים) (איור 2). </li></ol> 7. נציג תוצאות עבור מחקרים שכללו הערכת גודל האוטם ואזור בסיכון (AAR), על ידי הצבע הכחול של אוואן כלוריד tetrazolium triphenyl (TTC), לאחר 4 שעות של reperfusion, קשירת התקין של הנער ניתן לאשרעל ידי התבוננות הלבנה של רקמת שריר הלב דיסטלי אל תפר, כמו גם תפקוד לקוי של הקיר הקדמי, כפי שנצפה במהלך קשירת LAD חולף. Reperfusion ניתן לאמת על ידי שובו של הצבע האדום לרקמת שריר הלב לבין הפגנה של התאוששות מסוימת של תנועה הקיר הקדמי, נצפתה מיד לאחר קשירת LAD חולף. עבור מחקרים שכללו הערכת תפקוד הלב שיפוץ הלב על פני תקופה של זמן (7 - ל 28 - ימים ומעבר), קשירת התקין של איסכמיה ואחריו reperfusion יכול גם להיות מאושרת על ידי הלבנה של חוסר תפקוד הרקמה, של הקיר הקדמי והחזרת הצבע האדום עם התאוששות מסוימת של תנועה הקיר הבאים reperfusion. בנוסף, תפקוד הלב לקוי יכול להיקבע על ידי echocardiogram מתבצע 24 שעות ביממה LAD קשירת לפרסם, על מנת לקבוע את מידת אוטם שריר הלב המושרה. כל החיות עם קיצור החדר השמאלי השבר (LV FS) &lt;20%, כפי שנקבע בין echocardiogram, כמו גם תפקוד לקוי של הקיר הקדמי ההצעה עולה בקנה אחד עם האוטם, יהיה מזוהה המשמש למעקב תפקוד הלב מחקרים שיפוץ. שאם חולדות בקרה צפויים להיות נורמלי LV FS בין 40-45% (דל מונטה). <img src="/files/ftp_upload/2464/2464fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. תרשים סכמטי של אוטם שריר הלב לבין קשירת LAD. תרשים סכמטי של אוטם שריר הלב (1) ו (2) קשירת הקדמי של החדר השמאלי היורד (LAD) העורק באמצעות תפר, נהג לחקות את אוטם שריר הלב שנגרם על ידי היווצרות המגפה. <img src="/files/ftp_upload/2464/2464fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. תמונה ייצוגית של הלב חולדה בעקבות עמי. תמונה ייצוגית של הלב חולדה מראה את האזור (אזור שאינו occluded זלוף הכליליים) הכחול, שטח באזור אדום זלוף occluded (הכליליים המציין את אזור בסיכון (AAR) עבור אוטם, ושטח באזור (לבן / צהוב infarcted בתוך AAR).

<ol><li>Hunt, S. A., Baker, D. W., Chin, M. H., Cinquegrani, M. P., Feldmanmd, A. M., Francis, G. S., Ganiats, T. G., Goldstein, S., Gregoratos, G., Jessup, M. L., Noble, R. J., Packer, M., Silver, M. A., Stevenson, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SC.ACC%2FAHA+Guidelines+for+the+Evaluation+and+Management+of+Chronic+Heart+Failure+in+the+Adult%3A+Executive+Summary+A+Report+of+the+American+College+of+Cardiology%2FAmerican+Heart+Association+Task+Force+on+Practice+Guidelines+%28Committee+to+Revise+the+1995+Guidelines+for+the+Evaluation+and+Management+of+Heart+Failure%29%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">SC.ACC/AHA Guidelines for the Evaluation and Management of Chronic Heart Failure in the Adult: Executive Summary A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines (Committee to Revise the 1995 Guidelines for the Evaluation and Management of Heart Failure).</a> Circulation. 104, 2996-3007 (2001).</li>
<li>Goldman, S., Raya, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+infarct+model+of+myocardial+infarction+and+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">Rat infarct model of myocardial infarction and heart failure.</a> J Card Fail. 1, 169-177 (1995).</li>
<li>Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., &amp, I. zumo, S, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+cardiac+surgery%3A+comprehensive+techniques+for+the+generation+of+mouse+models+of+human+diseases+and+their+application+for+genomic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies.</a> Physiol Genomics. 16, 349-360 (2004).</li>
<li>Thygesen, K., Alpert, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Universal+Definition+of+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Universal Definition of Myocardial Infarction.</a> Circulation. 116, 2634-2653 (2007).</li>
<li>Vasilyev, N., Williams, T., Brennan, M. L., Unzek, S., Zhou, X., Heinecke, J. W., Spitz, D. R., Topol, E. J., Hazen, S. L., Penn, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloperoxidase-generated+oxidants+modulate+left+ventricular+remodeling+but+not+infarct+size+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Myeloperoxidase-generated oxidants modulate left ventricular remodeling but not infarct size after myocardial infarction.</a> Circulation. 112, 2812-2820 (2005).</li>
<li>McConnell, B. K., Popovic, Z., Mal, N., Lee, K., Bautista, J., Forudi, F., Schwartzman, R., Jin, J. P., Penn, M., Bond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+protein+kinase+A+interaction+with+A-kinase-anchoring+proteins+in+the+heart+in+vivo%3A+effects+on+cardiac+contractility%2C+protein+kinase+A+phosphorylation%2C+and+troponin+I+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Disruption of protein kinase A interaction with A-kinase-anchoring proteins in the heart in vivo: effects on cardiac contractility, protein kinase A phosphorylation, and troponin I proteolysis.</a> J Biol Chem. 284, 1583-1592 (2009).</li>
<li>Monte, D. el, Butler, F., Boecker, K., Gwathmey, W., K, J., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+technique+of+aortic+banding+followed+by+gene+transfer+during+hypertrophy+and+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Genomics%22%5BJournal%5D)">Novel technique of aortic banding followed by gene transfer during hypertrophy and heart failure.</a> Physiol. Genomics. 9, 49-56 (2002).</li>
<li>Huang, M. H., Nguyen, V., Wu, Y., Rastogi, S., McConnell, B. K., Wijaya, C., Uretsky, B. F., Poh, K. K., Tan, H. C., Cheng, J., Perin, E., Fujise, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+Infarct+Size+Reduction+by+Combination+Therapy+with+Milrinone+and+Esmolol+at+Early+Reperfusion+during+Acute+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Synergistic Infarct Size Reduction by Combination Therapy with Milrinone and Esmolol at Early Reperfusion during Acute Myocardial Infarction.</a> American Journal of Physiology. , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Kaiser, R. A., Bueno, O. F., Lips, D. J., Doevendans, P. A., Jones, F., Kimball, T. F., Molkentin, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+inhibition+of+p38+mitogen-activated+protein+kinase+antagonizes+cardiac+injury+and+cell+death+following+ischemia-reperfusion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Targeted inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase antagonizes cardiac injury and cell death following ischemia-reperfusion in vivo.</a> J Biol Chem. 279, 15524-15530 (2004).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

אוטם לבבי חריף (AMI) בחולדות, המכונה גם reperfusion-איסכמיה (IR), משמש בדרך כלל לחקות שיפוץ חדרי אנושי מוביל לאי ספיקת לב. ההתקדמות של בעיות בתפקוד LV ואי ספיקת לב במודלים של בעלי חיים (חולדות ועכברים) דומה לזה שנצפה בבני אדם אשר לקיים MI, לשרוד ואז לאחר מכן מתפתחת אי ספיקת לב (גולדמן). הליך זה התווה גרסה אחת של הטכניקה הזו והערות נוספות הכילו גם בתיאור וריאציות מתודולוגי. וריאציות נוספות כגון הליך חריף של אוטם שריר הלב (AMI) כוללים את משך הזמן של איסכמיה ומשך reperfusion. כמו כן,...

<table><tbody><tr><td>מנשם</td><td>Kent Scientific</td><td>TOPO</td><td>TOPO Dual Mode</td></tr><tr><td>סירקולטור תרמוסטטי E103</td><td>Harvard Apparatus</td><td>732802</td><td></td></tr><tr><td>מערכת שמיכה הומיותרמית</td><td>Harvard Apparatus</td><td>55-7222F</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סטריאו</td><td>Nikon Instruments</td><td>MMA36300</td><td>SMZ-645 Zoom Stereo Microscope</td></tr><tr><td>סטריליזטור חרוזים לוהט</td><td>Harvard Apparatus</td><td>610183</td><td></td></tr><tr><td>מכונת גילוח חשמלית</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>להבים וידיות</td><td>Welch Allyn</td><td>690047-1</td><td>להבי לרינגוסקופ סטנדרטיים (מנורה)</td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14014-17</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14072-10</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>Fine Science Tools</td><td>11028-15</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה קמורה</td><td>Fine Science Tools</td><td>11001-12</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>Fine Science Tools</td><td>12004-18</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>Fine Science Tools</td><td>91201-13</td><td></td></tr><tr><td>מרחיב חזה</td><td>Fine Science Tools</td><td>17008-07</td><td></td></tr><tr><td>מסכות</td><td>VWR international</td><td>47730-640</td><td></td></tr><tr><td>ספוגי גזה</td><td>Dermacea</td><td>441205</td><td></td></tr><tr><td>כפפות סטריליות</td><td>Cardinal Health</td><td>2D7203I</td><td></td></tr><tr><td>צינורית PE 90</td><td>BD Biosciences</td><td>427420</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 20 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>301625</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה Prolene 6-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>8706H</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה משי 2-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>K873H</td><td></td></tr><tr><td>זריקת פנטוברביטול נתרן</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td>NDC 67386-501-55</td><td></td></tr><tr><td>פובידון-יוד</td><td>NOVAPLUS</td><td>V10-8204</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>Pharmaceuticals Inc.</td><td>NDC 12496-0757-1</td><td></td></tr></tbody></table>

באוטם שריר הלב אצל חולדות

Acute Myocardial Infarction in Rats

עם אי ספיקת לב מוביל את סיבת המוות בארה&quot;ב (האנט), מחקר ביו חיונית כדי לקדם טיפולים רפואיים למחלות לב וכלי דם. מודלים בבעלי חיים המחקים מחלות לב האדם, כגון אוטם שריר הלב (MI) ו-reperfusion איסכמיה (IR) שגורם לאי ספיקת לב, כמו גם הלחץ עומס (התכווצות העורקים רוחבי) שגורם היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב (גולדמן Tarnavski), דגמים שימושי ללמוד למחלות לב וכלי דם. בפרט, שריר הלב (MI) היא הגורם המוביל בתחלואה ותמותה קרדיו למרות השליטה גורמי סיכון מסוימים כגון טרשת עורקים טיפולים באמצעות התערבות כירורגית (Thygesen). יתר על כן, אובדן חריף של שריר הלב בעקבות שריר הלב (MI) תוצאות איסכמיה מוגברת טעינת התנאים שגורם שיפוץ החדר של אזור הגבול infarcted ואת מרוחק שאינו אוטם שריר הלב. אפופטוזיס נמק Myocyte, ואת עומס מוגבר כתוצאה hemodynamic להפעיל מספר רב של איתות תאיים ביוכימיים אשר יוזם הרחבה LV, היפרטרופיה, עיוות צורה חדרית, ועל היווצרות צלקת קולגן. זה שיפוץ פתולוגית ואי לנרמל את הקיר גדל מדגיש תוצאות התרחבות פרוגרסיבי, גיוס של הגבול באזור שריר הלב לתוך הצלקת, ובסופו של דבר ההידרדרות בתפקוד התכווצות שריר הלב (אי ספיקת לב, כלומר). ההתקדמות של בעיות בתפקוד LV ואי ספיקת לב אצל חולדות דומה לזה שנצפה בחולים לקיים אוטם שריר הלב גדול, לשרוד, ולאחר מכן מתפתחת אי ספיקת לב (גולדמן). אקוטי אוטם שריר הלב (AMI) מודל בחולדות נעשה שימוש כדי לחקות מחלות לב וכלי דם אדם; להשתמש במיוחד כדי ללמוד מנגנוני איתות הלב קשור עם אי ספיקת לב, כמו גם להעריך את התרומה של אסטרטגיות טיפוליות לטיפול באי ספיקת לב. השיטה המתוארת בדוח זה הינו מודל של חולדה אקוטי אוטם שריר הלב (AMI). מודל זה מכונה גם קרדיומיופתיה איסכמיה איסכמי אקוטי או ואחריו reperfusion (IR), אשר המושרה על ידי תקופה של 30 דקות של איסכמיה חריפה על ידי קשירת של העורק השמאלי הקדמי היורד (LAD) ואחריו reperfusion של הרקמה על ידי משחררים את קשירת LAD (וסילייב, מקונל). פרוטוקול זה יתמקד הערכה של גודל האוטם ואזור בסיכון (AAR) על ידי הצבע הכחול של אוואן כלוריד tetrazolium triphenyl (TTC) לאחר 4 שעות של reperfusion: הערות נוספות לעבר הערכה של תפקוד שיפוץ לב על ידי שינוי משך reperfusion, מוצג גם. בסך הכל, זה מודל החיה AMI חולדה יעילה ללימוד תוצאה של אוטם שריר הלב על תפקוד pathophysiological ופיזיולוגיות לב.

המודל של עכברוש אקוטי אוטם שריר הלב (AMI) כדאי ללמוד תוצאה של MI על תפקוד pathophysiological ופיזיולוגיות לב.

מאחר שאי-ספיקת לב היא סיבת המוות המובילה בארה"ב (Hunt), מחקר ביו-רפואי הוא חיוני לקידום טיפולים רפואיים למערכת הלב וכלי הדם...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לדמות אוטם שריר לב חריף בחולדות, לצורך חקר מנגנוני השליחאות של הלב הקשורים לתגובה המיידית של השריר הלבבי לאיסכמיה לבבית, ולאחריה פגיעה כתוצאה מreperfusion. תגובות אלו כוללות את גודל האוטם, את השטח בסיכון ואת מוות התאים. השלב הראשון הוא חשיפת הבטן שמאל על ידי ביצוע חתך קטן במרווח הבין-צלעי הרביעי בצד שמאל של בית החזה, והרחבת הצלעות לאחר בידודן.העורק הכלילי השמאלי היורד, או LAD, נקשר באופן זמני למשך 30 דקות בעקבות התקופה האיסכמית. הקשירה של ה-LAD משוחררת כדי לאפשר רפרפוזיה לבבית לאחר תקופת רפרפוזיה של ארבע שעות. ה-LAD נקשר פעם נוספת לפני הוצאת הלב ובחינת גודלו של אזור המיוקרד עם האוטם, כולל השטחים שבסיכון והשטחים שאינם בסיכון.בסופו של דבר, ניתן להשתמש בתוצאות מההערכה ההיסטולוגית של השריר הלבבי המוטע (infarcted myocardium) כדי לבחון אסטרטגיות טיפוליות לטיפול באי-ספיקת לב. טכניקה זו יכולה לספק תובנות לגבי מנגנוני השליחויות הקשורים לתגובות המיידיות לאיסכמיה, ואחר כך לפגיעות משמעותיות כגון גודל השחית (infarct size), השטח שבסיכון (area at risk) ומות תאים.ניתן להשתמש במודל זה להערכת אסטרטגיות טיפוליות חדשניות לטיפול במחלה איסכמית של הלב. את הפרוצדורה ידגימו עובד מחקר בכיר ו-X, עמית פוסט-דוקטורט בכיר מהמעבדה של ד"ר Bradley McConnell במחלקה למדעי הפרמקולוגיה והרוקחות באוניברסיטת Houston, חברה מוסדית של המרכז הרפואי של טקסס. לפני תחילת הפרוצדורה הכירורגית, יש לחטא את משטח הניתוח באמצעות 70% ethanol.סטריליזציה של כל המכשירים הכירורגיים בעזרת סטריליזטור חרוזי חם לפני כל ניתוח בנפרד. המכשירים הנדרשים כוללים שניים מספריים כירורגיים, פינצטה אחת, פינצטה מעוקלת אחת, שני מחזיקי מחט ומגביח חזה.גודלו של אוטם תלוי במשך החסימה וכן בטמפרטורת הגוף. יש להכין גזה מכותנה ומקלונים שיהיו זמינים לטיפול בדימומים. במחקרים אלה נעשה שימוש אך ורק בבעלי חיים שעוברים בדיקה גופנית הכוללת בדיקה ויזואלית, מדידת קצב לב, קצב נשימה, טמפרטורת גוף ומשקל גוף.תעדו את המשקל ואת המאפיינים המזהים של בעלי חיים בריאים שיעברו ניתוח, יום לפני הניתוח. תנו מנה של buprenorphine. יש ללבוש חלוקים וכפפות לאורך כל ההליך, ויש להחליף כפפות בין ניתוחים פרטניים.כדי להתחיל, הרדימו חולדה והכינו את אזור הניתוח על ידי גילוח יסודי של הפרווה מאזורי הצוואר והחזה. חטאו את האזורים הגלוחים בעזרת תמיסת Betadine, ולאחריה 70% ethanol. חזרו על הליך זה שלוש פעמים.הניחו את בעל החיים על מערכת שמיכה לבידוד תרמי (homeo themic blanket) לשמירה נאותה על טמפרטורת הגוף, כאשר הוא שוכב על צדו הימני. חיתוך אלכסוני (beveling) של קצוות צינור פוליאתילן מקל על ההחדרה לתוך הלרינקס.החדירו את הפ stipule endotracheal tube בעזרת מיקרוסקופ סטריאוכירורגי. מניפולציה עדינה של הלשון לפי הצורך תוך שמירה על נתיב ראייה לקנה הנשימה. חברו את ה-endotracheal tube למנשם המוגדר לקצב של 80 נשימות לדקה ונפח שאיפה (tidal volume) של 1.2 milliliters ל-100 grams של משקל גוף.לאחר השגת הנשמה מכנית, הנח סדין סטרילי על החולדה כך שרק אזור הניתוח יישאר חשוף. לאחר שהנשמה יציבה הוקמה, פתח את בית החזה במרווח הבין-צלעי הרביעי השמאלי. צמצם ככל הניתן את מידת החיתוך ברקמה כדי להפחית את הסיכון לדימום.מקם מרחיב בית חזה במרווח הבין-צלעי הרביעי והרחב את הצלעות כדי לחשוף את החדר השמאלי או את ה-LV; יש להקפיד שלא לפגוע בריאה. לאחר מכן, פתח את פריקרד (קרום העטוף את הלב), והשאר אותו במקומו. במידת האפשר, זהה את החלק הפרוקסימלי של העורק הכלילי השמאלי הקדמי היורד, או ה-LAD, בעזרת מיקרוסקופ סטריאוסכירי כירורגי.קשרו באופן זמני, באמצעות ליגציה או קשר החלקה, את ה-LAD כדי להשראת איסכמיה. יש להיזהר לא להוציא את הלב עצמו אל מחוץ לחלל הבטן. ליגציה של ה-LAD מאושרת על ידי התבוננות בהבהרה של רקמת השריר הלבבי באופן דיסטלי לתפר, וכן על ידי תפקוד לקוי של הדופן הקדמית במהלך התקופה האיסכמית.לאחר תקופה איסכמית של 30 דקות, התחילו את הרפירפוזיה הלבבית על ידי חיתוך או שחרור של הליגטורה סביב ה-LAD באמצעות מספרי מיקרו-כירורגיה. הרפירפוזיה מאומתת על ידי חזרת הצבע האדום לרקמת השריר הלבבי והדגמה של התאוששות חלקית בתנועת הדופן הקדמית, הנצפית מיד לאחר שחרור הליגטורה של ה-LAD. הפרוצדורה זהה עבור חולדות בקבוצת הביקורת (sham), למעט העובדה שה-LAD אינו נקשר באופן זמני.הסר את מורחב בית החזה וסגור את הצלעות באמצעות תפריים בשיטת תפרים רצופים. לאחר סגירת הצלעות, צור לחץ שלילי בבית החזה כדי להבטיח נשימה תקינה על ידי שאיבת אוויר מחלל בית החזה. לבסוף, סגור את העור באמצעות תפרים רצופים. לאחר הניתוח, הנח את החולדה בכלוב עם פד חימום ומים; עקוב אחר טמפרטורת הגוף באמצעות מדחום רקטלי, אחר קצב הנשימה באמצעות בדיקה ויזואלית, ואחר קצב הלב באמצעות מישוש דופק וסימנים חריגים לכאב עד שהחיה תחזור להיות ניידת.יש להעניק תמיסת סליין סטרילית. אם נצפים סימנים של התייבשות, יש להעניק בופרנורפין מיד לאחר הניתוח. לאחר תקופת רפרפוזיה של ארבע שעות, החזיר את החולדה שהורדמה מחדש לאזור הניתוח.בצעו ויזואליזציה של החדר השמאלי כפי שהודגם קודם לכן, וקשרו את ה-LADA פעם שנייה, או שניתן לקשור מחדש את קשר ההחלקה. מזריקו מיליליטר אחד של 5% Evans blue ותמיסת סליין לתוך חלל החדר הימני והמתינו שתי דקות לביצוע הפרפוזיה. לאחר פרק זמן זה, מזריקו מיליליטר אחד של תמיסת אשלגן כלורי (potassium chloride) רוויה לתוך חלל החדר הימני כדי לעצור את פעימות הלב, הוציאו במהירות את הלב והטביעו אותו ב-2% agro phosphate buffered saline מחומם.לאחר שהאגרר מתגבש בטמפרטורת החדר, חתוך את הלב לפרוסות בעובי של 1 עד 2 מילימטרים. צבע את השריר הלבבי החיוני באמצעות 2% trien tetra oleum chloride או TTC למשך 20 דקות, וצלם תמונה של כל פרוסה שנוצרה. להלן תמונה מייצגת של לב חולדה.לאחר ארבע שעות של רפרפוזיה, השטח בכחול מייצג את האזור המבושם שאינו חסום או שאינו נמצא בסיכון. האזורים האדומים מצביעים על השטח הנמצא בסיכון לאינפרקציה, ואזורים לבנים-צהובים מציינים מיוקרד חומת (infarcted) בתוך השטח הנמצא בסיכון. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של אופן ביצוע השראה של אוטם שריר לבבי חריף בחולדות ושל המודל החייתי המשמש לחיקוי מחלה איסכמית של הלב בבני אדם.ניתן להשתמש במודל זה כדי לחקור את התגובות המיידיות לאיסכמיה, ולאחריהן פגיעה מרפרופוזיה המתרחשת במהלך השעות הראשונות, כגון גודל האוטם (infarct), אזור הסיכון ומוות תאי. כפי שניתן לראות בסרטון זה, בהצלחה בניסויים שלכם.

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מתואר מודל בעל יכולת שחזור גבוהה לאוטם שריר הלב בעכברים עם מניפולציות פולשניות מינימליות. ניתן לבצע את המודל בקלות, וכתוצאה מכך יכולת שחזור ושיעור הישרדות גבוהים. לפיכך, המודל המתואר יפחית את מספר בעלי החיים הנדרשים כמתבקש על ידי עקרון 3R (החלפה, עידון והפחתה).

נוהל כירורגי זעיר פולשנית של גרימת אוטם שריר הלב בעכברים

אוטם שריר הלב (MI) מלווה לא רק בתפקוד לב לקוי אלא גם באפופטוזיס באמיגדלה, אזור במוח המעורב בהשלכות ההתנהגותיות של MI. פרוטוקול זה מתאר כיצד לגרום ל-MI, לאסוף רקמת אמיגדלה ולמדוד בה פעילות קספאז-3, סמן לאפופטוזיס.

Caspase-3 פעילות באמיגדלה העכברוש נמדד על ידי Spectrofluorometry לאחר אוטם שריר הלב

ההערכה שלאחר המוות של אוטם שריר הלב (MI) במכרסמים מבוססת על כימות האוטם בקטעי לב מוכתמים. אנו מתארים שיטה מדויקת לכימות גודל האוטם באמצעות דגימה שיטתית של לבבות חולדות שנקטפו מהבסיס לקודקוד וניתוחי תמונה של חתכים היסטולוגיים מוכתמים בטריכרום.

כימות היסטולוגית של אוטם שריר לב כרוני אצל חולדות

אנו מספקים שיטה אמינה לקשירת העורק היורד הקדמי השמאלי (LAD) במודל עכבר. שיטה זו פחות פולשנית יחסית משיטות אחרות, הכוללת אינטובציה אנדוטרכיאלית, גישת כריתת בית החזה בצד שמאל וניתוח בית החזה. שיטה זו יכולה לשמש כמודל לאוטם שריר הלב החריף והכרוני (MI).

Murine שמאל Anterior יורד (LAD) קשירת עורקים הכליליים: דגם משופר או פשוט עבור אוטם שריר לב

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

מאמר זה מציג שיטה יעילה לבצע איסכמיה שריר הלב ואת reperfusion כרונית הבאים חולדות באמצעות גישה פולשנית מינימלית. בנוסף, הפונקציה השמאלית התפקוד התפקודי של חולדות מוערך על ידי הד ושיטות עבודה מבודדים לב.

חצי מינימלי שיטה פולשנית כדי לגרום אוטם שריר הלב בחולדות הערכה של תפקוד הלב על ידי מערכת לב עבודה מבודדת

תחת הרדמה מספקת, לב העכבר הוחצן דרך החלל הבין-קוסטלי, ואוטם שריר הלב נגרם בהצלחה על ידי קשירת העורק היורד הקדמי השמאלי (LAD) באמצעות חומרים הזמינים ברוב המעבדות.

שיטה פשוטה שונה להשראת אוטם שריר הלב בעכברים

מודל איסכמיה-רפרפוזיה שריר הלב של לב חולדה משופר על ידי שימוש ב- retractor מתוצרת עצמית, צינור פוליוויניל כלוריד ושיטת קשר ייחודית. אלקטרוקרדיוגרמה, טריפנילטרזוליום כלוריד וכתמים היסטולוגיים, ותוצאות ניתוח הישרדות באחוזים הראו כי לקבוצת המודל המשופרת יש שיעורי הצלחה והישרדות גבוהים יותר מאשר לקבוצת המודל הקיימת כבר.

מודל מכרסמים משופר של איסכמיה שריר הלב ופציעת רפרפוזיה

דג הזברה מהווה מודל חשוב ללמוד את מנגנוני התחדשות לב אצל בעלי חוליות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול אינדוקציה של אוטם לב דג הזברה למבוגרים באמצעות cryoinjury. שיטה זו גורמת מוות של תאים מסיבית של 20% קיר החדר, בדומה לזו שנצפתה אוטמים יונקים.

אינדוקציה של אוטם שריר הלב ב דג הזברה למבוגרים באמצעות Cryoinjury

אנו מתארים כיצד לבצע הדמיית MRI ו-PET של לב העכבר. הפרוטוקול מותאם להערכת יעילות הטיפול במודלים של אוטם שריר הלב ואי ספיקת לב.

MRI ו-PET במודלים של עכברים של אוטם שריר הלב

למדו כיצד ליצור מודל של אוטם שריר הלב אצל חולדות לחקר מנגנוני אישמיה וריפרפוזיה. השיטה כוללת קשירת עורק LAD למשך 30 דקות והערכת גודל האינפארקט והאזור בסיכון.

באוטם שריר הלב אצל חולדות

גלה סרטונים נוספים