Name: שיטת Alternant את המודל המסורתי של נאסא פריקה Hindlimb ב עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: למד שיטה חלופית לפריקת רגליים אחוריות בעכברים המפשטת את התהליך ומפחיתה מתח בבעלי החיים. השיטה משרה אטרופיה שרירית תוך שמירה על משקל גוף יציב ובריאות כללית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מבקשים להודות אנדרו J דאן, תלמידה מצטיינת לתואר מחקר במעבדה שלנו, לקבלת סיוע טכני שלו ודואג לבעלי החיים. מכון הבריאות הלאומי מענק HD058834 של אוניברסיטת מיזורי מדעי החיים המלגה במימון העבודה הזאת.

טרום ניתוח מכשירים / חומרים <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חוט חותכי / צבת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזה 2 x 2 "רפידות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כרית חימום </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקלות כסף חנקתי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפפות מנתחים סטרילית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שאיפה Isoflurane הרדמה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Chlorhexidine gluconate 4% (לקרצף כירורגית אנטיספטי) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלדה סטרילי 2-0 כירורגי תפר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 25 X 5 / 8 מחט מד (Autoclaved) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemostat (Autoclaved) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלדה תפר כירורגי </li></ul> ניתוח נוהל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירת שדה סטרילי. בצע הליך סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר עם 2 - 3% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום העכבר על כרית חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשפשף עם זנב פתרון chlorhexidine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר 5, 6, 7 או ה החלל חולייתי (בין שני גרמי בליטות על הזנב, מתחילים לספור מהקצה של שיער הגוף, בבסיס הזנב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש Hemostat ו 25 גרם מחט לעשות חור טייס בין שתי חוליות, לחלל חולייתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספרי תיל כדי לחתוך את תפר פלדה 10 ס"מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המחט והכנס תפר פלדה דרך חור, 5 ס"מ על תפר צד של הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל צד של הזנב צריך + 5 ס"מ של תפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום קצה האגודל על הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש יד חופשית שלך והרוח תפר פלדה על קצה האגודל ולסובב את הקצוות כדי ליצור לולאה גדולה. החלק פצע עגול או צריך להיות + 3 מ"מ אורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את האגודל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלאמפ קווצת שיער של תפר עם hemostat לבין לכופף אותו לתוך לולאה קטנה יותר, סוף המצורף ככל האפשר על מנת לסובב את הלולאה גדול המקורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתוך חוט עודף, לכופף את החוט וסובב בחזרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש דימום יתר, ניתן לעצור אותו עם מקלות כסף חנקתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את העכבר isoflurane ומקום בכלוב בית אחד כדי להתאושש במשך 5-7 ימים לפני hindlimb פריקה. הטבעות זנב להסתבך אם יש יותר מאחת עכבר שוכן יחד. </li></ol> 1. Hindlimb נוהל פריקה חומרים <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל 10-24 X 4 ברגים במכונה, אחד לכל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אגוז לנעול ניילון בגודל 10-24, אחד לכל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אגף אגוז 10 בגודל 24 X, שניים לכל בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל Washer ¼ 1 X, שתי לכל בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דייג המסתובב עם גודל הצמד וו # 6, 1-11/16 ", ואף אחד לכל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכונת תפירה מתכת סיסה. אחת לכל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נייר קליפ קטן עבור וו בצורת האות S, אחד לכל חיה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 x 2 "גזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 "קלסר שחור מהדק נייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרט דביק קלטת / מעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1-3/8 "בר מצופים פלדה מחוררת המשתרע מעט מעבר באורך מלא של הכלוב </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 ס"מ X 40 ס"מ X 20 ס"מ כלוב (כלוב חולדה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקבוק מים עם צינור bended. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נירוסטה תיל פלדה, בצורת U לתמוך בקבוק מים. </li></ul> קייג' ההתקנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את "1-38 פלדה מצופים בר מחוררת מעל הכלוב, ואת קלטת אותה temporally למטה עם סרט דביק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בורג 1 אגוז כנף לדפוק את המכשיר, להוסיף מכונת כביסה, והכנס את השוקת בורג במכונה פלדה מחוררת ± 15 ס"מ מהקצה של הכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף מכונת כביסה אגוז כנף. הדקו הן אגוזים כנף, אך לא להדק באופן מלא, שכן יהיה צורך לעשות התאמות מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את בורג במכונה דרך החור במרכז של סיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע את הסליל מליפול, לדפוק את אגוז לנעול ניילון לסוף בורג במכונה. סיסה אמור להסתובב בחופשיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצמד וו מן המסתובב הדיג דרך החלק התחתון של סיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש צבת להקים וו בצורת האות S מ מהדק. (גזור מן 2cm קליפ נייר בצורת וו). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס קצה אחד של וו בצורת האות S דרך החור של המסתובב הדיג ולצבוט אותו בחוזקה עם צבת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החוט בצורת U, במקביל בורג במכונה, על החלק הפנימי של הצד כלוב, לכופף את הקצוות חזרה לתמוך בקבוק מים מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את בקבוק מים לתוך חוט בצורת U, עם spicket פונה כלפי מטה, אבל לא נוגע בתחתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנד 2 "קלסר מהדק פתוחים, כך שהם לא יכולים לסגור קרוב. פשוט מתח מספיק כדי להחזיק 3-4 חתיכות של מזון זה בלי זה נושר. זה מונע את הכוח של מהדק מן ריסוק המזון, או שתסגור על האף העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום 3-4 חתיכות של מכרסם האוכל לתוך מהדק את הקלסר. </li></ol> Hindlimb פריקה של עכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הקצה הפתוח של וו בצורת האות S דרך טבעת קטנה יותר של טבעת הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את גובה העכבר על ידי הידוק או התרופפות אגוז כנף נמוכה על בורג במכונה. הגפיים התחתונות לא צריך להיות נשיאת משקל. לאחר גובה אופטימלי מושגת להדק את האום האגף העליון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקום מחדש של בקבוק מים, בצורת חוט, כך העכבר לא יכול לטפס על spicket עם hindlimbs שלה. אבטח את בקבוק המים בנייר דבק בצד הכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו את מהדק קלסר עם אוכל על תחתית הכלוב, כך העכבר לא יכול לטפס על זה, קלטת אותו עם סרט דביק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על אותו הליך, אם אחד או יותר של בעלי חיים היא פרקו hindlimb בצד השני של הכלוב. בית שתי חיות לכל כלוב; בחלל בעלי חיים, כך שהם יכולים כמעט לגעת זה בזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 2 X 2 גזה כדי רופף לעטוף את הזנב של העכבר על המסתובב הדגים. השתמש פיסה קטנה של סרט כדי לעטוף התחבושת, הבטחת גזה את הזנב. שלב זה חשוב כדי למנוע את הזנב שמוט כלפי מטה, המוביל דם נקווה קצה הזנב כי הזנב הופך נמקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת כמות קטנה של מצע קלח לכלוב. אל תוסיף יותר מדי מצעים אחרת העכבר יהיה מן תלולית של מצעים ניסיון לטעון hindlimbs על מצע. </li></ol> 2. נציג תוצאות: כדי להקים את ההצלחה של הטכניקה HU זנב טבעת מדדנו משקל גוף החיה לפני הניתוח טבעת הזנב, ולפני ואחרי HU והתאוששות; מסה soleus שריר, ומסת הכליה בכל הקבוצות. משקולות גוף של עכברים במשך הניסוי מוצגות באיור 1. משקולות גוף של עכברים לפני הניתוח זנב טבעת (24.7 ± 3.5G) לא היו שונים משמעותית אחרי 5 ימים של התאוששות מהניתוח זנב טבעת (24.3 ± 2.9g) לקראת האוניברסיטה. גם לא ירידה משמעותית במשקל הגוף מיד לאחר 14 ימים של האוניברסיטה העברית (22.7 ± 1.9g), 28 ימים של האוניברסיטה העברית (21.3 + 2.1g) או לאחר 3 ימי התאוששות מן האוניברסיטה העברית (24.0 ± 1.8g). למרות האוניברסיטה העברית עבור 14 ו 28 ימים הביא להפסד קטן (-6.8% ו 12%) אך לא משמעותי המוני הגוף, העכברים התאושש באופן מלא מראש HU שלהם משקולות הגוף אחרי 3 ימים של התאוששות. צריכת מזון עכברים שליטה אמבולטורי ועכברים האוניברסיטה העברית מוצגת באיור 3. מזון ממוצע הצריכה היומית לא היה שונה בעכברים HU על 28 ימים בהשוואה לקבוצת הביקורת. צפינו ניוון שרירים משמעותי soleus הבאים האוניברסיטה העברית במשך 14 ו - 28 ימים (-39.1% ו -46.6%) המציין הליך יעיל HU (איור 2). יתר על כן זו דרגת ניוון עולה בקנה אחד עם הערכים בספרות הצפוי 2-4 שבועות של האוניברסיטה העברית 2, 7, 8. לאחר 3 ימים של התאוששות מן האוניברסיטה העברית soleus מסה משמעותית ל -74% של ערכים שליטה. מסה Soleus בקבוצה התאוששות משמעותית יותר מאשר בשתי הקבוצות האוניברסיטה העברית, אבל עדיין משמעותית פחות חיות בקרת אמבולטורי. משקולות הכליה נמדדו אינדיקטור ללחץ בעלי חיים, הן את בלוטת יותרת הכליה מימין ומשמאל היו נכרת ומשקלו. משקולות הממוצע היה דומה לבקרה HU עכברים עכברים בכל הקבוצות (איור 4). בעבר היינו אצל חולדות הראו כי שיעור ההצלחה עבור מספר בעלי חיים בתחילת HU לעומת מספר החיות השלימה HU בלי יוצא של מנגנון ההשעיה (עקב חיות לעיסה באמצעות קלטת זנב המתיחה) היה 10 מתוך של 12 בטכניקה מורי הולטון-1. אף אחד העכברים (n = 54) במחקר זה מעולם לא ירדה מן ההשעיה לפני השלמת תקופת האוניברסיטה העברית. עשינו זאת, יש עכבר אחד שהתפתח זנב מודלק קשות. כאשר דלקת התברר, הסרנו את הטבעת הזנב כדי לאפשר את האזור מודלק לרפא, ולאחר מכן להציב עוד זנב טבעת כדי להשלים את משך הזמן של האוניברסיטה העברית. בעבר, כאשר השתמשנו בשיטת מורי-הולטון של האוניברסיטה העברית, אנו בדרך כלל לחסל 1-2 עכברים / קבוצה, כי הם באים מתוך מנגנון ההשעיה. בשיטה שובל, הטבעת לא היו פרקים של עכברים בשוגג יוצא של המנגנון האוניברסיטה העברית בתקופת האוניברסיטה העברית במשך 14 או 28 ימים (n = 54 עכברים). <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. משקל גוף שינויים (ממוצע ± SD). קיצורים: CON: נושאת משקל העכברים הביקורת (n = 76); Pre-HU: כל העכברים לפני האוניברסיטה (n = 54); HU14: hindlimb עכברים פרקו למשך 14 יום (n = 34); HU28: hindlimb עכברים פרקו עבור 28 ימים (n = 20); REC: עכברים hindlimb פרקו מותר כלוב להתאושש במשך 3 ימים (n = 22). הבדלים משמעותיים במשקל הגוף נצפו בין הקבוצות. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> 2. ניוון שרירים איור Soleus (ממוצע ± SD). קיצורים: CON: נושאת משקל העכברים הביקורת (n = 76); HU14: hindlimb עכברים פרקו למשך 14 יום (n = 34); HU28: hindlimb עכברים פרקו במשך 28 ימים (n = 20); ו REC: עכברים hindlimb פרקו מותר לכלוב להתאושש במשך 3 ימים (n = 22). * שונה באופן משמעותי (p &lt;0.001) מאשר השליטה נושאת משקל (CON). שונה δSignificantly (p &lt;0.01) מאשר שתי הקבוצות האוניברסיטה העברית. 467fig3.jpg "alt =" איור 3 "/&gt; איור 3. צריכת מזון (ממוצע ± סטיית תקן). ממוצע צריכת המזון היומית (גרם / יום) במהלך נושאות משקל ו hindlimb פריקה. קיצורים: נושאת משקל העכברים הביקורת (n = 76), האוניברסיטה העברית: עכברים hindlimb unloaded14 - 28 ימים. אין הבדלים משמעותיים בין CON וקבוצות HU נצפו. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="איור 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 4"> איור 4. המוניים הכליה (ממוצע ± SD). קיצורים: CON: נושאת משקל העכברים הביקורת (n = 76); HU14: hindlimb עכברים פרקו למשך 14 יום (n = 34); HU28: hindlimb עכברים פרקו במשך 28 ימים (n = 20); ו REC: עכברים hindlimb פרקו מותר לכלוב להתאושש במשך 3 ימים (n = 22). הבדלים משמעותיים נצפו בין הקבוצות.

<ol><li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gravitational+Physiol%22%5BJournal%5D)">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li>
<li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+disuse%3A+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li>
<li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Ca2%2B+transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li>
<li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spaceflight+and+bone+turnover%3A+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness%5BTitle%5D)+AND+%22BioScience%22%5BJournal%5D)">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li>
<li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindlimb+unloading+of+growing+rats%3A+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li>
<li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindlimb+unloading+rodent+model%3A+technical+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li>
<li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li>
<li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הערכנו שיטה חלופית של עכברים hindlimb פריקה, אשר אנו נחושים להיות מוצלח ביותר. השיטה זנב טבעת כמתואר כאן שימש ההשעיה לטווח ארוך hindlimb, וכדי ללמוד HU התאוששות הבאים. תחת כל התנאים הללו, לא היתה שום ראיה לכישלון להסתגל כפי שמעידים צריכת מזון יציבה, משקולות הגוף, משקולות הכליה של העכברים. זו טכניקה זנב טבעת HU קל לביצוע והוא יכול בקלות להיות משולב עם תרגול כירורגי מעט מאוד. ישנם מספר יתרונות השיטה זנב טבעת לעומת השיטה המסורתית 6 מורי הולטון-5,. ראשית, את העור ואת ההשתלה אתר טבעת על הזנב, כי הם תמיד נראים לעין, כך שאם מתעוררות בעיות ברור מיד, ולא רק בסוף תקופת ההשעיה. שנית, בעלי חיים אינם מסוגלים לצאת מנגנון ההשעיה בכל עת במהלך האוניברסיטה העברית, obviating את הצורך להכריע האם להמשיך עכבר או לא ערכת הנתונים. יתר על כן, העכברים לא טורחים מנגנון הטבעת כאשר הם משתחררים מן האוניברסיטה העברית להתאוששות, הם לא להתעסק עם הזנבות שלהם, המאפשר לשלב ההתאוששות חלקה הבא של האוניברסיטה העברית. לבסוף, עכברים פרקו hindlimb עם שיטת זנב טבעת לשמור על משקל גוף שלהם טוב יותר מאשר עכברים hindlimb פרקו בטכניקת זנב המתיחה מורי-הולטון. בידיים שלנו לאחר 14 ימים של האוניברסיטה העברית צפינו הפסד קטן (-6.8%) אך לא משמעותי המוני הגוף. בעוד אינגלס et al. נצפתה ירידה משמעותית -12% ממשקל הגוף אצל עכברים לאחר 14 ימים של האוניברסיטה העברית על ידי מורי שיטת-הולטון 3. למרות אינגלס לא דיווחו משקולות יותרת הכליה, נראה כי שיטת זנב טבעת שלנו מעניק פחות לחץ על העכבר (משקולות הכליה בעכברים HU שלנו אינם שונים מאשר שולטת) ותחזוקה טובה יותר של משקל הגוף לאורך כל התקופה hindlimb פריקה. לסיכום, טבעת זנב שיטת hindlimb הפריקה היה שפותחו ונבדקו על עכברים האוניברסיטה העברית עבור 14 ו 28 ימים, על עכברים חזר התאוששות בכלוב במשך 3 ימים אחרי האוניברסיטה העברית. על בסיס משקולות הכליה, מסת הגוף ואת צריכת המזון, עכברים הנראה מותאם היטב מנגנון זנב הטבעת. Hindlimb זנב טבעת פריקה השיטה היא אלטרנטיבה יעילה, פשוטה את הטכניקה המסורתית מורי-הולטון פריקה hindlimb.

<table><tbody><tr><td>קוצבי חוטים/פליירס</td><td>Ace Hardware</td><td>84-056</td><td></td></tr><tr><td>גזה</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-901</td><td></td></tr><tr><td>משטח חימום</td><td>קרן שמש</td><td>Z-1228-001</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים של כסף חנקתי</td><td>ARZOL</td><td>0001-2</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן, USP</td><td>Novaplus</td><td>NDC 0409-3292-49</td><td></td></tr><tr><td>כלורהקסידין גלוקונאט 4%</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>NDC 67618-200-01</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה כירורגי סטרילי מפלדת אל-חלד, 2-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>SS-28</td><td></td></tr><tr><td>מחט במידה 25 G, אורך 5/8 אינץ'</td><td>Terumo Medical Corp.</td><td>NN 2516R</td><td></td></tr><tr><td>תפסן דם/ מחזיק מחט</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>ברגי מכונה בגודל 10-24 X 4</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>90272</td><td></td></tr><tr><td>אום נעילה מניילון גודל 10 X 24</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>180141</td><td></td></tr><tr><td>בורג כנף גודל 10 X 24</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>180243</td><td></td></tr><tr><td>גודל שייבה רחבה (Fender Washer) &amp;#188; X 1</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>290012</td><td></td></tr><tr><td>מסובב דיג עם סנאפ (snap hook) גודל #6, 1-11/16&amp;#8221;</td><td>Bass Pro Shop</td><td>38-481-554-01</td><td></td></tr><tr><td>סpool מתכת למכונת תפירה.</td><td>Singer Instruments</td><td>45785</td><td></td></tr><tr><td>מהדק ניירות</td><td>Office Depot</td><td>221720</td><td></td></tr><tr><td>2&amp;#8221; תפסני נייר שחורים.</td><td>Office Depot</td><td>308957</td><td></td></tr><tr><td>סרט דבק רב-שימושי Scotch Duct Tape</td><td>Office Depot</td><td>790710</td><td></td></tr><tr><td>1-3/8&amp;#8221; מוט פלדה מחורץ מצופה</td><td>Home Depot</td><td>548932</td><td>בולט מעט מעבר לאורך המלא של הכלוב</td></tr><tr><td>כלוב בגודל 50 ס"מ X 40 ס"מ X 20 ס"מ (כלוב חולדות)</td><td>ייצור בעיצוב אלטרנטיבי</td><td>RC88D-PC</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק מים</td><td>ייצור עיצוב חלופי</td><td>WB16FS</td><td></td></tr><tr><td>חוט פלדת אל-חלד</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>SWX-4029</td><td>חוט בצורת U לתמיכה בבקבוק מים</td></tr></tbody></table>

שיטת alternant את המודל המסורתי של נאס&quot;א פריקה hindlimb ב עכברים

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

מורי-הולטון hindlimb פריקה (האוניברסיטה העברית) היא שיטה מקובלת הלאומי לאווירונאוטיקה וחלל המינהל (נאס&quot;א) קרקעיים מודל לחקר ניוון, חוסר שימוש במכרסמים 4-6. המחקר שלנו להעריך שיטה alternant את הטכניקה זהב סטנדרטי מורי-הולטון זנב המתיחה HU בעכברים. חמישים וארבע נקבות עכברים (4-8 מו.) היו האוניברסיטה העברית במשך 14 ימים (n = 34) או 28 ימים (n = 20). השחזור HU הוערכה לאחר 3 ימים של ambulation כלוב נורמלי הבאים HU (n = 22). העכברים מתאימים גיל (n = 76) שימש נושאת משקל שולטת. לפני HU זנב טבעת נוצרה עם חוט פלדה סטרילי 2-0 כירורגית שהועברה דרך ה -5, ה 6 או ה 7 בין השדרה שטח דיסק בצורת לזירה שממנה העכברים הושעו. מיקום החוליות עבור טבעת הזנב נבחר כראוי איזון משקל הגוף החי בלי להתערב עם עשיית הצרכים. אנחנו נקבע את ההצלחה של טכניקה זו על ידי האוניברסיטה העברית רומן בהערכת משקל הגוף לפני ואחרי האוניברסיטה העברית, תואר של ניוון soleus, ו HU מסת הכליה הבאה. משקל גוף של עכברים לפני האוניברסיטה (24.3 ± 2.9g) לא ירידה משמעותית מיד לאחר 14d של האוניברסיטה העברית (22.7 ± 1.9g), 28d של האוניברסיטה העברית (21.3 + 2.1g) או לאחר התאוששות 3 ימים (24.0 ± 1.8g) . מסת שריר Soleus ירד באופן משמעותי (-39.1% ו -46.6%) בעקבות האוניברסיטה העברית במשך 14 ימים ו -28 ימים בהתאמה (p &lt;0.001). לאחר 3 ימים של התאוששות soleus מסה משמעותית ל -74% של ערכים שליטה. משקולות הכליה של עכברים HU לא היו שונים בהשוואה לעכברים שליטה. ההצלחה של השיטה שלנו הרומן HU מתבטא בשמירה על משקל גוף החיה, להשוות משקולות בלוטת יותרת הכליה, וניוון soleus HU הבאים, המתאים לערכים בספרות צפוי 2, 7, 8. היתרונות העיקריים של שיטה זו האוניברסיטה כוללים: 1) להקל על בדיקה הזנב במהלך ההשעיה; 2) ירדה הסבירות זנבות בכחלון, מודלק, ו / או נמקי נצפו לעתים קרובות עם מקליטה זנב HU: 3) כל אפשרות של עכברים ללעוס את המתיחה הקלטת יוצא של מנגנון ההשעיה, ו 4) התאוששות מהירה ופעילות כלוב נורמלי מיד אחרי האוניברסיטה העברית.

פיתחנו hindlimb alternant פריקה מודל בעכברים. היתרון העיקרי של השיטה שלנו hindlimb זנב טבעת פריקה על הטכניקה המקובלת זנב המתיחה מורי-הולטון היא הליך פשוט פשוט זה ממזער הלחץ על החיה.

שיטת Alternant את המודל המסורתי של נאס&quot;א פריקה Hindlimb ב עכברים

שיטת פריקת עומס מהגפיים האחוריות (HU) של Morey-Holton היא מודל מבוסס-קרקע מקובל של נאס"א (NASA) לחקר...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבצע פריקה של הגפיים האחוריות (hind limb unloading או hu) בעכברים בשיטה פשוטה וישירה יותר, הממזערת את הלחץ על בעל החיים. שיטת קיבוע הזנב זו משרה בהצלחה אטרופיה של הגפיים האחוריות מבלי לפגוע בבריאות הכללית ובמשקל הגוף. השלב הראשון הוא השתלת טבעת זנב לעכבר בוגר.חשוב לתעד את משקל הגוף ותצפיות בריאותיות לאורך כל המחקר. לאחר מכן, מרכיבים את מכשיר פריקת העומס מהגפיים האחוריות ומניחים אותו בתוך הכלוב שבו תתבצע הפריקה. ברגע שהבעל חיים התאושש, הוא ממוקם במכשיר לצורך הליך פריקת העומס.בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות באמצעות מדידות של מסת הגוף ומסת השריר, שהראו אטרופיה שרירית בגפיים האחוריות של עכברים ללא עומס. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון טכניקת ההדבקה של Maori Holton, הוא שעור הזנב נשאר גלוי תמיד. העכברים אינם מסוגלים להשתחרר ממכשיר התליה או לשחק עם הטבעת, והם מחלימים מהר יותר ושומרים על משקל גוף יציב.שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחומי הפיזיולוגיה של השריר-שלד, וכן בביולוגיה של כבידה וחלל, כגון כיצד למנוע ניוון שרירי השלד ואובדן מסה גרמיים לאחר תקופות ממושכות של חוסר פעילות גופנית, מנוחה במיטה, קיבוע גפיים, מיקרו-כבידה, מחלות נוירומסקולריות ועם הגיל. רעיון זה עלה תחילה כאשר נתקלנו בסיבוכים בטכניקת הטייפינג של הזנב לפי Maury Holden. איבדנו באופן עקבי בעלי חיים ונתונים ניסיוניים עקב בריחתם של העכברים מהמכשיר לקיבוע הגפיים האחוריות בעת הדגמת טכניקה זו.היום איתנו הם אנדרה פרארה, עמית מחקר בכיר מהמעבדה שלי. מסייעים לאנדרה הן ג'קלין קריסי, סטודנטית לדוקטורט במעבדה, ואנדרו דאן, סטודנט לתואר ראשון גם הוא מהמעבדה. התחילו בסטריליזציה של אזור הניתוח, הרדימו עכבר בוגר באמצעות isoflurine, ולאחר מכן רשמו את משקל העכבר והניחו אותו על פד חימום. הכינו את הזנב לניתוח על ידי קרצוף עם תמיסת chlorhexidine.התחילו לספור מקצה שיער הגוף בבסיס הזנב כדי לאתר את הרווח הבין-חולייתי החמישי, השישי או השביעי בין שתי בליטות עצמיות בזנב. השתמשו בהמוסטט ובמחט 20 5G כדי ליצור חור פיילוט בין שתי חוליות לתוך הרווח הבין-חולייתי. הוציאו את המחט והכניסו תפר פלדה.גזרו לאורך של 10 סנטימטרים דרך החור. 5 סנטימטרים של תפר צריכים לבלוט מכל צד של הזנב. הניחו את קצה האגודל על הזנב והשתמשו ביד החופשית כדי ללפוף את תפר הפלדה סביב האגודל.סובבו את הקצוות כדי ליצור לולאה גדולה. החלק המגולגל או המעגלי צריך להיות באורך של פלוס או מינוס שלושה מילימטרים. קבעו גדיל אחד של התפר בעזרת המוסטט וכופפו אותו ללולאה קטנה יותר, שקציה המחוברת קרוב ככל האפשר לפיתול בלולאה הגדולה המקורית.גזרו את עודפי התיל וכפפו את התיל המגולגל לאחור. עצרו דימומים עודפים באמצעות מקלו כסוף ניטראט (silver nitrate). אפשרו לבעל החיים להתאושש במשך חמישה עד שבעה ימים לפני פריקת הגפיים האחוריות או hu לאחר הניתוח.הניחו את הבית בבודדות כדי למנוע מהטבעות הזנב להסתבך. הניחו מוט פלדה חרוץ ומצופה, בעובי 3/8 אינץ' וברוחב אינץ' אחד, מעל לכלוב והדביקו אותו בעזרת סרט דביק. הוסיפו דיסקיות ואום כנף נוספים, אך אל תהדקו אותם באופן מלא כדי לאפשר ביצוע התאמות מאוחר יותר.החדירו את בורג המכונה דרך החור המרכזי של הסליל כדי למנוע ממנו ליפול. הברגו אום נעילה מניילון לקצה בורג המכונה. הסליל צריך להסתובב בחופשיות.השחילו את סנאפ-הוק (snap hook) של מסובב דייג דרך החלק התחתון של הבובין. השתמשו בפלייר כדי לעצב וו בצורת S ממהדק נייר. השחילו קצה אחד של הוו בצורת S דרך החור של מסובב הדייג והדקו אותו בעזרת הפלייר.מקמו תיל בצורת U במקביל לבורג המכונה בחלקו הפנימי של הכלוב וכופפו את הקצוות מעל הצד. כדי לתמוך בבקבוק מים מלא, הכניסו בקבוק מים לתוך התיל בצורת ה-U כאשר הברז פונה כלפי מטה, אך אינו נוגע בתחתית. אבטחו את בקבוק המים לכלוב בעזרת סרט דבק רב-שימושי (duct tape).כופפו תפס בינדר בגודל שני אינץ' כך שיהיה פתוח, תוך השארת מתיחות מספיקה כדי להחזיק מספר חתיכות מזון מבלי למעוך את הגרגירים לפני הליך פריקת הגפיים האחוריות. רשמו את משקל העכבר לצורך השוואות. מאוחר יותר, הכניסו את הקצה הפתוח של וו ה-S דרך הטבעת הקטנה הבולטת מהזנב.כוון את גובה העכבר על ידי הידוק או שחרור של בורג הכנף התחתון בבורג המכונה. הגפיים התחתונות לא צריכות לשאת משקל. לאחר הגעה לגובה האופטימלי, הדק את בורג הכנף העליון, ומקם מחדש את בקבוק המים באמצעות תיל מעוצב מחדש כך שהעכבר לא יוכל לטפס על הברז עם גפיו האחוריים.כדי למדוד את צריכת המזון במהלך המחקר, שקלו את הכופתיות לפני הנחתן בתפסן הקיפוד (binder clamp). ספקו כ-8 עד 10 גרם כדי לאפשר צריכה של כ-5 עד 6 גרם מזון ליום. עבור כל מיקום של עכבר, הצמידו את תפסן הקיפוד עם המזון לתחתית הכלוב כך שהעכבר לא יוכל לטפס עליו, והדביקו אותו בעזרת סרט דביק חזק (duct tape).השתמשו בשתי רצועות (Gores) בגודל שני על שני אינץ' באופן רפוי. לפפו את הזנב סביב הסיבוב של הדג. לפפו פיסה קטנה של זנב סביב הרצועות כדי להדק אותן לזנב.שלב זה חשוב כדי למנוע מהזנב להשתהות כלפי מטה, דבר שיוביל למשיכת דם לקצה הזנב ולהפיכתו לנמקית. חזרו על אותו הליך עבור חיה נוספת בצד השני של הכלוב. כאשר משכנים שתי חיות בכלוב, מקמו אותן כך שהן כמעט יוכלו לגעת זו בזו.במרכז הכלוב. אני מוסיף כמות קטנה של מצע תירס (cob bedding) לכלוב, תוך כדי וידוא שאין מספיק חומר כדי שהעכבר יוכל להשתמש בו ליצירת תלולית. לאחר הליך פריקת הגפיים האחוריות (hind limb unloading), הוצא את החיה מהמכשיר והסר את טבעת הזנב.בעזרת קוצב חוטים, רשמו את משקל הגוף והחזירו את החיה לכלוב המגורים להחלמה. לאחר תקופת החלמה, ממתינים שוב ומודדים את השריר הסולאוס (soleus) ואת מסות בלוטות האדרנלין. משקלי הגוף לפני ניתוח הזינב לא היו שונים באופן מובהק מאלו של חמישה ימים לאחר הניתוח ולפני hu.למרות שפריקה של הגפיים האחוריות למשך 14 ו-28 ימים הובילה לאובדן קטן אך לא מובהק במסת הגוף, העכברים התאוששו במלואם למשקל גופם שלפני ה-HU, לאחר שלושה ימי התאוששות. צריכת המזון עבור עכברי ביקורת ניידים ועכברי HU מוצגת כאן.צריכת המזון היומית הממוצעת בעכברי HU לא הייתה שונה מזו של קבוצות הביקורת לאורך 28 ימים. נצפתה Atrophy משמעותית של שריר ה-soleus לאחר HU למשך 14 ו-28 ימים, מה שמעיד על הליך יעיל לאחר שלושה ימי התאוששות. מסת ה-soleus הייתה גדולה משמעותית משתי קבוצות ה-HU, אך עדיין קטנה משמעותית מזו של בעלי החיים בביקורת הניידת.שתי בלוטות האדרנלין, השמאלית והימנית, הוצאו ונשקלו כדי לספק מדד לרמת הסטרס של החיה. כפי שניתן לראות כאן, המשקלים הממוצעים היו דומים בין עכברי הביקורת לעכברי HU. לאחר רכישת מיומנות, ניתן להשלים את ניתוח התפירה תוך חמש עד 10 דקות לכל עכבר, ואת סידור הכלוב תוך 15 דקות לאחר הליך זה. ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון Hein, limb reloading והשקמה מאטרופיה עקב חוסר שימוש, כדי לענות על שאלות נוספות, כגון האופן שבו מערכות השרירים והעצם יכולות להשתקם ולהגיב לתקופות ממושכות אלו של חוסר שימוש.כעת, לאחר שצפיתם בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה כיצד לבצע פריקה של הגפיים האחוריות בעכברים. טכניקה זו מאפשרת לחקור רקמות ומערכות מרובות, כגון מערכות קרדיווסקולריות, שלד-שריר ומערכות פנימיות, תחת תנאים של פריקה וטעינה מחדש, ובשימוש במגוון מודלים של עכברים, כגון knockout או knockin.

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ההליך הכירורגי לזירוז של איסכמיה hindlimb החד צדדית באה לידי ביטוי, עם אישור של איסכמיה על ידי הדמיה זלוף דופלר לייזר.

דגם Murine של איסכמיה Hindlimb

מודל חיתוך רוחב העצב הטיביאלי הוא מודל נסבל היטב, אימות, ושחזור של ניוון שרירים שלד. הפרוטוקול כירורגית המודל מתואר והפגין בC57Black6 עכברים.

חיתוך רוחב עצב הטיביאלי - מודל סטנדרטי לניוון שרירים שלד מושרה denervation בעכברים

MicroRNAs ממלאים תפקידים מכריעים במוח ומהווים מטרות פוטנציאליות למידול ניוון עצבי. עם זאת, הפרעה ברמות ה-miRNA היא מאתגרת בשל האורך הקצר של ה-miRNA וחוסר הנגישות של רקמת המוח. סרטון זה מציג שיטה לעיצוב אנטגומיר והעברה ספציפית למוח באמצעות נוירופפטיד בעכברים.

חלופה פשוטה להזרקת stereotactic למציאה ספציפית המוח של מירנה

מודל הרומן הזה להשתלה הגפיים האחוריות orthotopic בתוך העכבר, החלת טכניקה השרוול הלא תפר עבור השקה סופר-כלי הדם, מספק כלי רב עוצמה עבור מחקר אימונולוגי מכניסטית in vivo הקשורים אלוגרפט מרוכבים vascularized (VCA).

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

אינדוקציה כירורגית של איסכמיה של הגפיים האחוריות בעכבר שימושית לבחינת אנגיוגנזה, אולם זה נפגע בזני עכברים מסוימים המולדים המציגים נמק רקמות המושרה על ידי איסכמיה. מתוארות שיטות לגרימת איסכמיה תת-חריפה בגפיים באמצעות מכווצים אמרואידים כדי לעקוף בעיה זו באמצעות אינדוקציה של חסימת עורקים הדרגתית.

שיטות חריפה subacute Murine Hindlimb איסכמיה

על ידי שימוש חדשני קרקעיים אנלוגי מודל, אנחנו מסוגלים לחקות משימת החלל כולל טיול (0 גרם), שהייה על מאדים (0.38 g) בחולדות. דגם זה מאפשר הערכה האורך של השינויים הפיזיולוגיים המתרחשים במהלך שני השלבים היפו-כבידה של המשימה.

מחקה משימת החלל למאדים באמצעות Hindlimb פריקה חלקית משקל הנושאת בחולדות

מודל זה חיה מאפשר לחוקרים לגרום מימפתית משני משמעותי מבחינה סטטיסטית בתוך האיבר הארוך של עכברים, שנמשך לפחות 8 שבועות. המודל יכול לשמש כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של ימפתית ולחקור אפשרויות טיפול הרומן.

שיטה מתוקנת לגרימת ימפתית משנית בתוך הגפיים של עכברים

פרוטוקול זה מציג מודל חזק, לשחזור של כלי דם מרוכבים allotransplant (VCA) מכוון למחקר בו זמנית של אימונולוגיה והתאוששות תפקודית. הזמן שהושקע בטכניקה קפדנית בהשתלה אורתוטופית ירך ימין באמצע הירך האחורי עם תפורים ביד וסמיכות עצבית מניב את היכולת ללמוד התאוששות תפקודית.

לוקח את הצעד הבא: מודל השתלת גפיים אחוריות קופטציה עצבית כדי למקסם את ההתאוששות תפקודית בחולדה

מאמר זה מדגים גישה כירורגית יעילה ליצירת איסכמיה חריפה בעכברים עם חתך קטן. גישה זו יכולה להיות מיושמת על ידי רוב קבוצות המחקר ללא כל שדרוגי מעבדה.

מודל כירורגי מותאם של איסכמיה בגפיים אחוריות ב- ApoE-/- עכברים באמצעות חתך מיניאטורי

טכניקות זעיר פולשניות ומכשיר מעבדה פשוט משפרים את יכולת השכפול של מודל הפגיעה בחוט השדרה על ידי הפחתת הנזק האופרטיבי לחיות הניסוי ומתן אפשרות לתחזוקה של המורפולוגיה האנטומית. השיטה כדאית משום שהתוצאות האמינות וההליך הניתן לשחזור מקלים על חקירת מנגנוני תיקון המחלה.

הקמת מודל פגיעה בעמוד השדרה של חבלה בעכבר המבוסס על טכניקה זעיר פולשנית

מודל מורין זה משלב עלבון ספטי עם חוסר שימוש בשרירי הגפיים האחוריות כדי לשחזר את התכונה המרותקת למיטה של חולה ספיגה טיפוסי. המודל מייצג סטייה משמעותית ממודלים קודמים לחקר תפקוד לקוי של שרירים באלח דם והוא גישה ניתנת לשחזור לטיפול באסטרטגיות טיפוליות לטיפול במצב זה.

מודל פרה-קליני של מיופתיה הנגרמת מאלח דם עם חוסר שימוש בעכברים

למד שיטה חלופית לפריקת רגליים אחוריות בעכברים המפשטת את התהליך ומפחיתה מתח בבעלי החיים. השיטה משרה אטרופיה שרירית תוך שמירה על משקל גוף יציב ובריאות כללית.

שיטת Alternant את המודל המסורתי של נאס"א פריקה Hindlimb ב עכברים

גלה סרטונים נוספים