Name: מערכת סגורה Cell תרבות פרוטוקול באמצעות כלי HYPERStack עם טכנולוגיה חומר חדיר גז (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-29T17:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 48 s
Description: למדו את פרוטוקול תרבות התאים הסגור באמצעות כלי HYPERStack עם חומר חדיר גז. שיטה זו מאפשרת אחסון תאים ביעילות גבוהה תוך שמירה על סטריליות וחילוף גזים אופטימלי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות Lonza Walkersville על עזרתם עם ידע מערכת סגורה, עיצוב שקית, הלוואה של חומרי איטום תיק רתכים, כמו גם יצירת התיק שרטוטים HYPERStack.

הגז כלי HYPERStack טכנולוגיה חדיר מכוסה תחת פטנט אמריקאי #: 7745209. הכותבים הם עובדי קורנינג מדעי החיים, Inc המייצרת את המכשיר משמש במאמר זה.

כלי HYPERStack בהצלחה צמח מהונדסים, בתאי גזע ראשוניים. התוספות נוזל לתוך כלי נערכו באמצעות חיבורי שקית aseptic ידי להאכיל הכבידה גם על ידי שאיבה ממיכל התקשורת סטרילית. הכלי מספק עלייה של יותר מ 2.5 באזור גידול לעומת מוצר צלחת מוערמים של תפוסת נפח זהה. HYPERStack 6000-12 יש 2 ס&quot;מ צמיחה באזור, HYPERStack-36 יש 18,000 2 ס&quot;מ באזור צמיחה, ואת HYPERStack-120 יש 60,000 2 ס&quot;מ של אזור הגידול. על ידי הגדלת שטח הפנים, משתמשים יכולים לייצר תאים יותר מן האוכלוסייה תא הרבה זהה או להפחית השתנות. הם גם מסוגלים לשמור מרחב / או באמצעות כלי עבודה פחות כדי להשיג את פלט התא אותו, או להגדיל את התפוקה התא מבלי להוסיף אנשים, סוויטות חדר נקי, או חממות. המערכת מיוצרת בשיטות הרכבה נמוכה חלקיקים ללא שימוש בדבקים. זוהי מערכת סגורה אשר preassembled עם ערכות ומסננים צינורות, שקיות משולשת ובתנאי סטרילית.

<table><tbody><tr><td>מדיום בשק של 1.5L</td><td>Lonza Inc.</td><td>TBD</td><td>1350ml מדיום + 150ml סרום (במידת הצורך)</td></tr><tr><td>מדיום בשק של 4.0L</td><td>Lonza Inc.</td><td>TBD</td><td>3600ml מדיום + 400ml סרום (במידת הצורך)</td></tr><tr><td>מכל HYPERStack Vessel-12</td><td>Corning</td><td>10012</td><td></td></tr><tr><td>מכל HYPERStack Vessel-36</td><td>Corning</td><td>10036</td><td></td></tr><tr><td>Wedge למילוי</td><td>Corning</td><td>10040</td><td></td></tr><tr><td>מניפולטור לערימה</td><td>Corning</td><td>TBD</td><td></td></tr><tr><td>התקן דגימה HyQtainer Sub-Assembly</td><td>Hyclone</td><td>SH3B0324.01</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת עצירה (Quencher) במדיום בשק של 600ml (10% FBS IMDM)</td><td>Lonza Inc.</td><td>TBD</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת דיסוציאציה של תאים בנפח 600ml</td><td>Lonza Inc.</td><td>TBD</td><td></td></tr></tbody></table>

מערכת סגורה cell תרבות פרוטוקול באמצעות כלי hyperstack עם טכנולוגיה חומר חדיר גז

Closed System Cell Culture Protocol Using HYPERStack Vessels with Gas Permeable Material Technology

נפח גדול חסיד תרבית תאים סטנדרטיים כיום על תא מוערמים מוצרים צלחת צמיחה כאשר חרוזים microcarrier הם לא הבחירה האופטימלית. כלי HYPERStack לאפשר מידה מערכת סגורה למעלה מן המוצרים הנוכחי צלחת מוערמים ומספק&gt; 2.5x התאים יותר תפוסת נפח זהה. כלי HYPERStack פונקציה באמצעות חומר חדיר גז המאפשר חילופי גזים להתרחש, ולכן ביטול הצורך אמיץ פנימיים בתוך כלי. חיסול אמיץ מאפשרת לתא שבו מתרחשת צמיחת תאים להיות ממוזער כדי להפחית את החלל, המאפשר לשכבות יותר של האזור צמיחת תאים בתוך השטח תפוסת נפח זהה. עבור יישומים רבים, כגון טיפול בתאי או ייצור החיסון, במערכת סגורה נדרש צמיחת תאים והקציר. כלי HYPERStack מאפשר התא מגיב בנוסף והסרה באמצעות צינורות משקיות התקשורת או בשיטות אחרות. פרוטוקול זה יסביר את הטכנולוגיה מאחורי החומר גז חדיר המשמש כלי HYPERStack, דיפוזיה תוצאות הגז כדי לענות על הצרכים המטבולית של תאים, תא סגור מערכת פרוטוקולי גידול, שיטות המסיק השונות.

מבוא לתוך פרוטוקול הטכנולוגיה, וטיפול של כלי HYPERStack קורנינג ואביזרים המשמשים תרבית תאים תשואה גבוהה חסיד. פרוטוקול יציג כיצד להשתמש בכלי מערכת סגורה לקציר תא הגדלת מעל הנוכחי מוצרים מוערמים צלחת.

מערכת סגורה Cell תרבות פרוטוקול באמצעות כלי HYPERStack עם טכנולוגיה חומר חדיר גז

תרבית תאים נ adherent בנפח גדול מבוססת כיום באופן סטנדרטי על מוצרים להצמחת תאים בצלחות מוערמות, כאשר חרוזי מיקרו-נשא (microcarrier beads) אינם מהווים בחירה אופטימלית.

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להדגים את השימוש הנכון במערכת סגורה של כלי ה-Corning Hypers stack. מטרה זו מושגת תחילה על ידי הזרקה ומילוי של הכלי במדיום בשיטת הזנה בכבידה. לאחר מכן, תרחיף התאים מבודל בכל אחת מהשכבות והתאים עוברים אינקובציה.לאחר הדגירה, מסירים את המצע המשומש. השלב האחרון של הפרוצדורה הוא קצירת התאים מכלי ה-hypers stack. לבסוף, מתקבלים תוצאות של דיפוזיית גזים המראות את יכולתם של התאים לגשת לחמצן במהלך הגדילה עד להגעה לfluence כאשר נעשה שימוש במערכת הסגורה של ה-hypers stack.היתרון המרכזי של כלי ה-hypers stack עם חומר חדיר לגז הוא שהוא מספק שטח פנים מוגדל לצמיחת תאים. על ידי ביטול המרווח העליון (head space) בכלי, עמיתי p pardo ידגים כעת פרוטוקול למערכת סגורה לשימוש בכלי ה-hypers stack. כלי ה-hypers stack מורכב מ-stat, שהוא תא תרבית התאים הבודד המורכב מהלוח העליון ומסרט חדיר לגז.התאים גודלים בתוך תא זה. המניפולטור הנוזלי מחבר כל אחת משכבות ה-ette יחד בתוך מודול. המודולים מחוברים באמצעות צינוריות כדי ליצור כלים בכפולות של 12 שכבות.הסוללה מאפשרת למשתמש לבצע מניפולציה אחת של נוזלים לכל הכלי. סוללת האוויר מחברת גם את שכבות ה-stat זו לזו, אך היא משמשת לדחיקת אוויר מהכלי כאשר מתבצעות הוספות של נוזלים ומכילה קו מילוי לשימוש בזמן המילוי בין השכבות. שכבת stat היא חלל אוויר פתוח הנקרא החלל הטרכאלי (tracheal space), המאפשר חילופי גזים להתרחש דרך הקרום חדיר-הגז של כל שכבה.צינור העברת הנוזלים מחובר למסד הנוזלים והוא מרכיב הניתן להתאמה המשמש לביצוע כל מניפולציות הנוזלים במערכת סגורה לצורך שחרור עודפי אוויר תוך שמירה על סטריליות. נעשה שימוש בצינור האוורור. צינור האוורור מחובר למסד האוויר ומכיל מסנן אוויר.לצינורות הטיפול בנוזלים מחוברים צינור רדיפה ומסנן, המשמשים לפינוי הנוזלים מצינורות הטיפול בנוזלים לאחר מילוי הכלי. בפרוטוקול זה נעשה שימוש גם במניפולטור Corning Stack או CSM, שהוא מכשיר טיפול המסייע במיקום הכליים במיקומים הנכונים במהלך השימוש. בהדגמה זו, מוצגת תרבית תאים במערכת סגורה עבור כלי בעל 36 שכבות חדיר לגז.עם זאת, בשימוש ב-CSM, ניתן למצוא פרטים לביצוע הליך זה בכלי בעל 12 שכבות באמצעות טריס מילוי (filling wedge) בפרוטוקול הכתוב המצורף. התחל בהכנת 3.9 ליטר של מצע בשקיות לפניe חידוע שפופרת המצע. חבר את שקית הסרום לשקית המצע וערבב היטב עד להשגת ריכוז הסרום הרצוי.סגרו באמצעות תסמיכי שקיות גדולים כמות של כ-300 מיליליטר של מצע בשקית. פעולה זו תבטיח שכל התאים המוחדרים ינוצלו במהלך המילוי, ושלא יישארו תאים בשקית המצע. הניחו את המצע על מעמד לשקיות לצורך חדירת התאים למצע.מלאו מזרק המחובר לצינור בתרחיף תאים. חברו את המזרק המכיל את תרחיף התאים לשקית המצע באמצעות הלחמה של הצינורות (tube welding). השתמשו בצינור באורך 3 מעל 16 אינץ' מהמזרק לשקית.הזריקו את תרחיף התאים לתוך שק המצע וערבבו היטב. ניתן לחבר את שק המצע המוחדר לצינור טיפול בנוזלים של הכלי בקוטר של שלוש שמיניות מהאינץ' באמצעות ריתוך צינורות או באמצעות מחברים רב-תכליתיים. היום נשתמש בריתוך צינורות.סגרו את התסמיכים על צינורות הטיפול בנוזלים וצינורות השטיפה (chase tubes) של הכלי. מקמו את הכלי בעל 36 השכבות בתוך ה-CSM במיקום הטעינה. חברו את צינור מסנן האוורור לתסמיך ההחזקה ב-CSM.הדק את המכסה והעבר את ה-CSM למצב מילוי כדי למקם את מסנן האוויר בנקודה הגבוהה ביותר, למניעת רטיבה במהלך פעולת המילוי. זווית של 10 מעלות מאפשרת גם התאזנות של הנוזל לשכבות במהלך המילוי תוך פינוי אוויר מקו המילוי. מקם את שק המדিয়াম באותו גובה של הכלי תוך שמירה על תסבוב צינור המעבר (chase tube) סגור.פתחו את תסביב צינור הטיפול בנוזלים ואת תסביב שקי המצע כדי לאפשר לנוזל להיכנס לכלי. בעזרת מעמד השקיות, הרימו את שק המצע כדי לסייע לזרימת תרחיף התאים אל תוך הכלי. מלאו את הכלי עד שכל המצע המוחדר ייכנס אליו.החלק העליון של שק המצע צריך להכיל עדיין 300 milliliters של מצע. הסר את התפסן משק המצע כדי להמשיך למלא את הכלי כאשר הנוזל מתקרב לסנפיר האוויר העליון. האט את קצב המילוי על ידי הורדת שק המצע כדי למנוע מילוי יתר.העלה באיטיות את מפלס הנוזל עד לקו המילוי וסגור את צינורות הטיפול בנוזלים. העבר את המכל ב-CSM לעמדת הבידוד, כאשר שתי מערכות הסניפטרים נמצאות בעמדה הגבוהה ביותר. הורד את שק המצע לגובה נמוך מזה של המכל.כאשר פילטר השטיפה (chase filter) מוחזק במצב אנכי, פתחו את תפסית צינור השטיפה. פעולה זו תרוקן או תשטוף את המדיום שבצינור העברת הנוזלים חזרה אל שק המדיום. לאחר שהצינור התרוקן, סגרו את התפסית על צינור שק המדיום.שמרו על מסנן צינור המעקב (chase tube filter) במצב אנכי. פתחו את התסמין בצינור העברת הנוזלים של הכלי כדי לאפשר לכל הנוזל שנותר להיכנס ולהגיע לשיווי משקל בתוך הכלי. המתינו דקה אחת עד שתיים עד לסיום התהליך.בשלב הבא, סובב את המכל ב-CSM כך שהמניפולטורים יהיו מצד שמאל. הורד את המכל לעמדת הטעינה ב-CSM. סגור את התפסנים הן בצינור המעקב והן בצינור טיפול בנוזלים.ניתן כעת להסיר את שק המצע מהכלי, או להשאירו מחובר לשימוש מאוחר יותר בהליך הקציר. כדי לאחסן את שק המצע המחובר, גלגלו את השק והניחו אותו תחת רצועות הקיבוע במגש האחסון של הכלי. לבסוף, העבירו את הכלי לאינקובטור. בעת נשיאת הכלי, היזהרו למנוע חדירה של נוזלים למסנן פתח האוורור.פעולה זו מתבצעת על ידי הטיית קצה המניפולד מעט כלפי מעלה. כדי להתחיל את פרוצדורת הקצירה, רתכו את צינור תמיסת הדיסוציאציה של התאים ואת שקי צינון אתר התגובה (quench bags) יחד כדי ליצור את מכלול שקי הקצירה, וודאו שכל תפסני הצינורות סגורים. הוציאו את הכלי מהאינקובטור והניחו אותו ב-CSM במיקום הטעינה.שחררו את שק המצע ממתחת לרצועות הקיבוע ותלו אותו על התושבת. עמדו לצדו, והדקו את המכסה כדי לאבטח את הכלי. חברו את צינור האוורור לתפסן ההחזקה והעבירו את ה-CSM למצב מילוי.ודאו ששק המצע על מעמד השקים תלוי נמוך יותר מהכלי. פתחו את התפס על צינור שק המצע ואת צינור הטיפול בנוזלים של הכלי כדי לאפשר למצע לזרום אל השק המחובר. ברגע שהכלי ריק בערך בשלושת רבעיו, שנו את הגדרות ה-CSM למצב הריק סופי.כאשר הכלי וצינורות העברת הנוזלים ריקים, הרימו את הצינורות כדי לדחוף את המצע אל מעבר לתסבוב שעל צינור שקית המצע המשומש. לאחר מכן, סגרו הן את התסבוב שעל צינור העברת הנוזלים והן את התסבוב שעל צינור שקית המצע המשומש. החליפו את שקית המצע המשומש במכלול שקית האיסוף באמצעות ריתוך צינורות.העלה את גובה מכלול שקית פירוק התאים מעל גובה הכלי באמצעות מעמד השקית. מקם את ה-CSM בעמדת המילוי. פתח את תפס תובוס תמיסת פירוק התאים ואת התפס של מכלול שקית האיסוף, והעבר את התמיסה אל הכלי.עם השלמת ההעברה, סגרו את התפסנים על צינורות הטיפול בנוזלים ועל צינור תמיסת הפירוק של התאים. לאחר מכן, העבירו את ה-CSM למצב הטעינה תוך כדי החזקת ידית המיקום האופקית במצב פתוח. נערו בעדינות את כלי הדגימה מצד לצד באמצעות הגלגל, כדי להפיץ את התמיסה על שכבות התאים.ניתן להחזיר מדי פעם את הכלי לעמדת המילוי במהלך הטלטול כדי לשמור על פיזור שווה של התמיסה. לאחר שהתמיסה פוזרה כראוי, שחררו את המנוף ב-CSM כדי לנעול אותו בעמדת המילוי. השאירו את הכלי בעמדה זו במהלך זמן הדיסוציאציה הנדרש עבור התאים.השתמש בעכירות כמדד לקביעת ניתוק התאים. לאחר הניתוק, העבר את ה-CSM למצב טעינה. פתח את תפס שקית הכיבוי ואת תפס צינור הטיפול בנוזלים כדי לאפשר למצע הכיבוי להיכנס לכלי.סגרו את התפס על צינורות העברת הנוזלים. לאחר השלמת ההעברה, החזירו את ה-CSM למצב הטעינה והחזיקו את ידית המיקום האופקית כדי לנדנד את המכל מצד לצד. בעזרת מעמד השקיות, הנמיכו את מיקום מכלב האיסוף אל מתחת למפלס המכל.כוון את ה-CSM למצב ריק. פתח את תסביך התקיעות (Clamp) של צינור טיפול בנוזלים של המכל והעבר את תמיסת התאים בחזרה לשק ההקפאה (quench bag). החזר את ה-CSM למצב טעינה ונתק את תסביך שק האיסוף מהמכל באמצעות מכשיר לאיטום צינורות.כעת תמיסת התאים מוכנה לעיבוד במערכות גידול תאים מסורתיות. בשיטת ה-Headspace, החמצן במצע מרוקן בשיעור ממוצע של 50% במהלך שלושה ימים. בתרבית, נתון זה מראה את הירידה במיליגרמים לליטר של חמצן ברמת התאים לאורך זמן באותה מערכת גידול; מפל החמצן לאורך גובה מצע של שלושה מילימטרים גבוה בכמעט 50% בחיבור שבין המצע ל-Headspace מאשר בשכבת התאים.מוצג אחוז החמצן בחלל הקנה של מערך ה-hypers במהלך גדילת התאים. האיור מראה כי לאורך 96 שעות, אחוז החמצן בין השכבות המספקות חמצן לכל תחתית של קולט חדיר לגזים נותר קבוע. הדבר מדגים את יכולתם של התאים לגשת לחמצן במהלך הגדילה עד להגעה למצב של התלכדות (confluency).לאחר צפייה בסרטון זה, תרכיבו הבנה טובה לגבי אופן המילוי והקציר של כלי ה-Corning Hypers stack במערכת סגורה.

closed-system-cell-culture-protocol-using-hyperstack-vessels-with-gas

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ייצור ואימות של פלטפורמת התוספת על המציע שליטה משופרת על חמצון במרחב ובזמן בצלחת 6 באר. המכשיר להתאמה מספר מערכות התרבות יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעות של חמצן על ריפוי הפצע.

ייצור והפעלת הוספת חמצן עבור תרבויות נייד חסיד

מכשיר microfluidic מידור לחקר נדידת תאי גזע סרטני מתואר. פלטפורמה חדשנית זו יוצרת microenvironment סלולרי קיימא ומאפשרת הדמיה מיקרוסקופית של תנועת תאים חייה. מאוד ניעתי תאים סרטניים מבודדים ללמוד מנגנונים מולקולריים של חדירה אגרסיבית, שעלולים לגרום לטיפולים יעילים יותר בעתיד.

הערכה של נדידת תאי גזע סרטני באמצעות מכשירי microfluidic מידור והדמית תא חייה

תרבות מסתובב בתא מערכת המאפשר לתאי האפיתל לצמוח בתנאים פיסיולוגיים וכתוצאה מכך היווצרות 3 D-המצרפי הסלולרי המתואר. מצרפים את התצוגה...

Culturing ויישומים של סיבוב bioreactor וול כלי נגזר מודלים 3D תא אפיתל

אנחנו פיתחו תרבות תא אוטומטית וחקירת פלטפורמה לניסויי גירוי תא מיקרו בקנה מידה. הפלטפורמה מציעה שליטה פשוטה, תכליתית, ומדויקת בטיפוח ועידוד אוכלוסיות קטנות של תאים, ומחל lysates לניתוחים מולקולריים. הפלטפורמה מתאימה גם למחקרים המשתמשים בתאים ו / או חומרים כימיים יקרים.

פלטפורמה אוטומטית צדדי לניסויים בגירוי תא מיקרו בקנה מידה

פרוטוקול זה מתאר שיטה לpermeabilization הזמני של תאים חסיד באמצעות סילון גז אינרטי. טכניקה זו מאפשרת ההעברה של חומר וביומולקולות גנטיים לתאי יונקים חסיד על ידי הניצול של כוחות מכאניים כדי לשבש את קרום הפלזמה.

Permeabilization של תאים דבקו שימוש בגז אינרטי Jet

ויסות נוטריינטים באמצעות הזנה מותאמת לצמיחה מתמשכת משפר את שיעורי הגדילה של ספרואידים של תאי יונקים בהשוואה להזנת אצווה לסירוגין עבור תרביות בביו-ריאקטורים מעורבבים.  מחקר זה מדגים את השיטות הנדרשות להקמת תרביות פשוטות המוזנות בקצב מותאם.

תקנת מזין ידי האכלה רציפה להרחבה בקנה מידה הגדולה של בתאי יונקים ב Spheroids

להלן פרוטוקול לגידול תאי גזע פלוריפוטנטיים (PSC) ותאי גזע עצביים (NSC) במערכת תרבית תאים סגורה המאפשרת סטריליות ושחזור מקסימליים, ומחליפה את ארון הבטיחות הביולוגית והחממה המסורתיים. ציוד זה עומד בהנחיות שיטות ייצור קליניות טובות (cGMP) ושיטות מעבדה קליניות טובות (cGLP).

Culturing האדם pluripotent ואת עצבי תאי גזע מערכת תרבית תאים סגורות למחקר בסיסי פרה

אנו מציגים מודל סרטן על שבב מיקרופלואידים, הטכנולוגיה "מאיץ האבולוציה", אשר מספק פלטפורמה לשליטה לטווח ארוך בזמן אמת מחקרים כמותיים של הדינמיקה של סרטן בתנאים סביבתיים המוגדרים היטב בתא יחיד רמת. טכנולוגיה זו צפויה לעבוד כמודל מבחנה עבור מחקר בסיסי או פיתוח תרופות טרום-קליני.

הדור של מעברי מדרגות של סמים הטרוגנית ברחבי אוכלוסיות סרטן על מאיץ האבולוציה Microfluidic להתבוננות בזמן אמת

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקצירת תאים דבקים מצלוחיות רב-שכבתיות באופן סגור חצי אוטומטי באמצעות מערכת צנטריפוגות נגד הזרמה. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם עבור קצירת תאים דבקים ותרחיפים מפלטפורמות הרחבת תאים אחרות עם שינויים מעטים בשלבים הקיימים.

עיבוד תאי גזע מזנכימליים אנושיים ליישומים קליניים באמצעות זרימת עבודה סגורה חצי אוטומטית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשגת ייצור בקנה מידה גדול של תאים דבקים באמצעות מערכת סגורה לחלוטין המבוססת על מיקרו-נשאים נמסים ברמת GMP. הטיפוח של תאי גזע מזנכימליים אנושיים, תאי HEK293T ותאי ורו אומת ועמד הן בדרישות הכמות והן בקריטריוני האיכות של תעשיית התרפיה התאית והגנטית.

ייצור תאים בקנה מידה גדול המבוסס על מיקרו-נשאים נקבוביים נמסים ברמת GMP (תנאי ייצור נאותים)

למדו את פרוטוקול תרבות התאים הסגור באמצעות כלי HYPERStack עם חומר חדיר גז. שיטה זו מאפשרת אחסון תאים ביעילות גבוהה תוך שמירה על סטריליות וחילוף גזים אופטימלי.

מערכת סגורה Cell תרבות פרוטוקול באמצעות כלי HYPERStack עם טכנולוגיה חומר חדיר גז

גלה סרטונים נוספים