Name: לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-05T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: למדו כיצד לגרום פגיעה ריאות חריפה בעכברים באמצעות אוורור מכני בלחץ גבוה. שיטה זו מאפשרת איסוף דגימות דם ונוזלי שטיפה ברונכואלוולריים לניתוח מנגנוני הפגיעה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<p class="jove_content"&gt; הלימודים הנוכחית נתמכים על ידי הלאומי ללב, ריאות, ודם המכון גרנט R01-HL0921, R01-DK083385 ו R01HL098294 כדי HK Eltzschig, 1K08HL102267-01 ל ט Eckle, ואת הקרן לחינוך הרדמה מענקי מחקר ל ט Eckle ו HK Eltzschig, ו American Heart Association גרנט ט Eckle ו HK Eltzschig ודויטשה Forschungsgemeinschaft (DFG) מלגת מחקר מ Koeppen.</p

הערות כלליות: כל הפעולות צריכות להתבצע תחת מיקרוסקופ לנתח זקוף (אולימפוס, SZX10 הודעה עם Z-Axis Crank עם סטנד בום סטנד STU2) וכן באמצעות coagulator כירורגית (11). קבוצות הניסוי צריך להיות תואם ככל האפשר גיל ומשקל כדי להבטיח את ההשוואה של התוצאות. הממשל, טמפרטורה לחץ דם, נוזל ההרדמה צריך להיות יציב לאורך כל הדרך. 1. הרדמה והכנת קנה הנשימה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש C57BL / 6 עכברים, כי הם לפחות 10 שבועות ויש לך גוף של 22-25 גרם להשרות הרדמה באמצעות נתרן pentobarbital ב 70 מנה ip מ"ג / ק"ג משקל גוף (6). שמור הרדמה עם כ 10 מ"ג / ק"ג / שעה נתרן pentobarbital. היה זהיר עם מינון יתר שכן הדבר עלול להפחית באופן משמעותי את לחץ הדם. Re-המינון של pentobarbital - גם לאחר שעות, יכולה להוביל לעלייה ברמות קשות פלזמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר אינדוקציה הרדמה, עכברים מאובטח במצב שכיבה עם הגפיים העליונות והתחתונות המצורפת השולחן באמצעות סרט דביק, תפר מהודק עד הקרסוליים. לעשות את אותו הדבר עבור הראש באמצעות השיניים. הרחקה מספיק חשוב אינטובציה מוצלחת ניתוח מבוקר היטב. לפני הניתוח, לכסות את העכבר עם שמן מינרלי כדי להפחית את הסיכון לאלרגיה שיער העכבר. על מנת להבטיח כי טמפרטורת הגוף נשאר יציב לכסות את העכברים עם לעטוף מזון זמינים מסחרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום עכברים על השולחן בקרת טמפרטורה מחומם (RT, Effenberg, מינכן, גרמניה) עם בדיקה מדחום רקטלי המצורפת בקר משוב תרמי לשמירה על חום גופם על 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את קנה הנשימה בניתוח. לנתח הצדדים לרוחב הגב של קנה הנשימה של הרקמה החיבורית מקום שני 3.0 תפר משי כירורגית (הרווארד המנגנון, ארה"ב) כל 10 ס"מ מתחת לקנה הנשימה. התפרים צריך להיות כ 1 ס"מ זו מזו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לחתוך את הקנה 3-4 מ"מ מתחת הגרון בין שני הסחוסים מעגלית באמצעות מקפרסון-Vannas מספריים (8 ס"מ, להב ישר; Precision Instruments העולם, ארה"ב). הקפד לא לגרום לדימום, שכן הדבר עלול לבלבל את הפרמטרים התוצאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע אינטובציה לקנה הנשימה באמצעות פוליאתילן cannulae בוטה (Insyte 22g, Beckton דיקינסון, ארה"ב). הכנס את קצה cannulae פוליאתילן בזווית של 85 מעלות לתוך קנה הנשימה. ואז להטות את cannulae כך עולה בקנה אחד עם לומן קנה הנשימה. לאט לאט לקדם את הצינור בהמשך קנה הנשימה עד קצה cannulae נעלם בתוך הפתח החזה. לקבע את הצינורית בתנוחה זו עם תפר שתי משי כירורגית להציב הגבי של קנה הנשימה (ראה 1.4). </li></ol> 2. טכניקה של פגיעה ההנשמה-Induced ריאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את צינור ההנשמה. כדי לגרום פגיעה ריאות אנו משתמשים בטכניקה נשלטת לחץ אוורור באמצעות C סרוו 900 מסימנס (DRE וטרינרית, ארה"ב). בעלי חיים יהיה מאוורר באמצעות לחץ inspiratory שיא של 45 תדר, mbar של 80 נשימות / דקה לבין לחץ חיובי בסוף הנשיפה של 0-3 mbar עם FiO 2 = 1.0. ההשראה יחס תפוגה צריכים להיות 01:01. למרות העובדה כי ה-C סרוו 900 בנוי כמו מאוורר לבני אדם, השימוש בו הגדרה ההנשמה נשלט הלחץ עובד מצוין אוורור של עכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוניטור קצב הלב עם א.ק.ג. (למשל Hewlett Packard, B blingen, גרמניה). ודא כי קצב הלב לא לרדת מתחת 400. אחד צריך לראות שינוי של ציר הלב בצד ימין, כאשר אוורור מכני הוא הנהיג כסימן גדל הלחצים בעורק הריאה בעקבות עלייה בלחץ intrathoracic. אם העכבר מפתח ברדיקרדיה, לבדוק את הטמפרטורה ואת המינון הרדמה / ריכוז. Xylacin / Ketamin הרדמה מעוררת בלב ליבו של 250 / דקה ולכן אינו מומלץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלת החלפת נוזלים תקין. עירוי תמיסת מלח רגיל עם 0.1 מ"ל / שעה באמצעות קטטר עורקי או ורידי יש לבצע לפני אוורור כדי להבטיח הגשת ורידי מספיק. בשל הלחצים אוורור גבוהה החזרה ורידית ללב נפגעת, דבר שעשוי להוביל לירידה קריטית של לחץ עורקי ממוצע. כמו כן, בולוס מלוחים של μl 500 יכול להינתן ip לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום קטטר בעורק הראש עבור הקלטה רציפה של לחץ דם (27). צרף את הזרוע לגוף לפני שאתה מתחיל לנתח את העורק. עורק הצוואר חשוף דרך לנתיחה בוטה של ​​שרירי paratracheal. בעקבות חשיפת נוסף והימנעות קפדנית של טראומה כל רקמות (במיוחד של העצב מחנק), קטטר מוכנס לתוך הכלי באמצעות שני התפרים ואת מלחציים קטן (37). זה יחשוף עוד קטע של העורק. מניחים ליגטורה בסוף מאוד של עורק הצוואר. צרף מהדק גדול לסוף תפר כדי להשיג ה מתח או לקבעדואר תפר לשולחן באמצעות קלטת. מקום אחר תפר סביב העורק לנתח את העורק עד הסוף דיסטלי מאוד. כאן, במקום מהדק קטן. השתמש במספריים מיקרו לחתוך פתח אלכסוני קטן לתוך העורק. החזק את הפתיחה עם מלקחיים קנס (דומון, WPI) ולקדם את הקטטר בגודל תקין עם הידיים / מלקחיים. צור קשר עם תפר השני שלך ולהבטיח את העורק. שחרר את מהדק ולקדם את הקטטר יותר. Secure את הקטטר קשרים עם כמה קלטות. לחילופין את הקטטר העורק הראשי יכול להיות מקום בסוף הניסוי כדי לאסוף דגימות דם עורקי לניתוח גז דם. </li></ol> 3. שחזור של דגימות רקמה אחרי 3 שעות של אוורור מכני, נאספות דגימות כדי להעריך את מידת הפגיעה ריאות. אנו ממליצים על איסוף נוזל שטיפה brochnoalveolar (BAL), הדם בעורקים רקמת הריאה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג נוזל BAL בסוף הניסוי. לאחר העמקה של הרדמה, שטוף את צינור לקנה הנשימה עם פוספט 1 מ"ל בופר סליין (PBS). הנוזל צריך להישאר קנה הנשימה / הריאות למשך שלוש שניות לפני זה הוא התאוששות באמצעות מזרק המחובר. BAL היא Snap-קפואים בחנקן נוזלי המאוחסן ב -80 ° C לניתוח נוסף. שים לב כי נפח התאושש יכול להיות משמעותית פחות מ"ל 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע גז בדיקות דם בסוף הניסוי. כדי לעשות זאת, חתך צריכה להיעשות ממש מתחת לעצם החזה. החזק את החזה עם מלקחיים במידה חתך לאורך כלוב הצלעות. בשלב הבא, הסרעפת היא חרות בקצוות והוא לגזור מן הצלעות. עכשיו יש נוף פתוח לתוך הפתח התחתון של החזה. הרם את החזה עם מלקחיים ולפתוח את בית החזה על ידי חתכים ארוכים בצד ימין ושמאל (לרוחב ככל האפשר) כדי להשלים את קיר בית החזה הקדמי מופנה מעלה במחלקות. זה צריך להיעשות, בעוד בעלי החיים עדיין ניסיוני מאוורר מכאני. החדר השמאלי הוא ניקב באמצעות מחט 27 ½ G וניתוח דם עורקי מתבצע באמצעות מערכת i-STAT (אבוט, ארה"ב). אם ניתוח עורקי גז דם יש לבצע, BAL לא ניתן להשיג, שכן זו תהיה confounder משמעותית את התוצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחילופין שיטה לעיל, דגימות דם עורקי ניתן לאסוף באמצעות קטטר העורק הראשי. אולם זה צריך להיעשות לפני BAL מתקבל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> והבלו הריאות en-הגוש ידי משיכת את לב לחתוך את קנה הנשימה. האם פיסת רקמה מוכנה לספוג דם, כך באתר כירורגית גלוי. משוך את הלב לכיוון הבטן לחתוך בזהירות לאורך עמוד השדרה לגייס את כל איברי החזה. חותכים את אבי העורקים, להסיר את איברי החזה ומניחים אותם על שולחן הניתוח נקיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את הלב ואת כלי מרכזי של המדגם רקמות. ודא כי אין כל רקמת בלוטת התימוס מחוברת עדיין הריאה. הפרד את הריאות עם מספריים ומניחים צינורות בודדים Snap-להקפיא. חנות ב -80 ° C לניתוח נוסף. </li></ol> 4. מדידה של פגיעה ריאות אנו ממליצים להשתמש בפרמטרים התוצאה הבאה כדי להעריך את מידת הפגיעה ריאות: ביצוע ELISA אלבומין (Bethyl מעבדות, ארה"ב) ו myeloperoxidase (MPO) ELISA (Hycult ביוטכנולוגיה, ארה"ב) כדי להעריך את מידת תפקוד מחסום וכמות דלקתיות תאים בנוזל BAL. בצע ELISA MPO גם בצורת רקמת הריאה. אם רטוב עד יבש יחס נמדדת איננו להשיג נוזל BAL ואת מחזור הדם הריאתי אינו סמוק (ראה 3.3). מדדו את המשקל של הריאות לאחר כריתה. ואז הריאות הם lyophilized עבור 48 שעות ו רקמת הריאות שוב נמדד. אז היחס רטוב אל היבשה, כפי שהיא נמדדת מ"ג של מים לכל מיליגרם של רקמה יבשה (5). <img src="/files/ftp_upload/2525/2525fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. התוכן חלבון BAL בתגובה וילי. עכברים היו מורדמים עם pentobarbital, אוורור מכני הונהג ועכברים היו מאוורר באמצעות לחץ שבשליטת הגדרות (לחץ inspiratory של 45 mbar, חיובי בסוף exspiratory לחץ mbar 3, 100% השראה ריכוז החמצן). לאחר 0, 1, 2 ו - 3 שעות של אוורור BAL היה לקצור את תכולת החלבון היה לכמת באמצעות assay חומצה bicinchoninic (assay BCA). השינוי היחסי של התוכן חלבון מוצג מנורמל ל -0 שעות של אוורור (n = 4 לכל קבוצה, * מציין p &lt;0.05 לעומת שליטה, ממוצע ± SEM)

<ol><li>Eckle, T., Faigle, M., Grenz, A., Laucher, S., Thompson, L. F., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A2B+adenosine+receptor+dampens+hypoxia-induced+vascular+leak%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A2B adenosine receptor dampens hypoxia-induced vascular leak.</a> Blood. 111, 2024-2035 (2008).</li>
<li>Eckle, T., Fullbier, L. G. renz, A,, Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Usefulness+of+pressure-controlled+ventilation+at+high+inspiratory+pressures+to+induce+acute+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Usefulness of pressure-controlled ventilation at high inspiratory pressures to induce acute lung injury in mice.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, 718-724 (2008).</li>
<li>Eckle, T., Fullbier, L., Wehrmann, M., Khoury, J., Mittelbronn, M., Ibla, J., Rosenberger, P., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+ectonucleotidases+CD39+and+CD73+in+innate+protection+during+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Identification of ectonucleotidases CD39 and CD73 in innate protection during acute lung injury.</a> J Immunol. 178, 8127-8137 (2007).</li>
<li>Eckle, T., Grenz, A., Kohler, D., Redel, A., Falk, M., Rolauffs, B., Osswald, H., Kehl, F., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+evaluation+of+a+novel+model+for+cardiac+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Systematic evaluation of a novel model for cardiac ischemic preconditioning in mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291, 2533-2540 (2006).</li>
<li>Eckle, T., Grenz, A., Laucher, S., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A2B+adenosine+receptor+signaling+attenuates+acute+lung+injury+by+enhancing+alveolar+fluid+clearance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">A2B adenosine receptor signaling attenuates acute lung injury by enhancing alveolar fluid clearance in mice.</a> J Clin Invest. 118, 3301-3315 (2008).</li>
<li>Eckle, T., Krahn, T., Grenz, A., Kohler, D., Mittelbronn, M., Ledent, C., Jacobson, M. A., Osswald, H., Thompson, L. F., Unertl, K., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardioprotection+by+ecto-5%27-nucleotidase+%28CD73%29+and+A2B+adenosine+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardioprotection by ecto-5'-nucleotidase (CD73) and A2B adenosine receptors.</a> Circulation. 115, 1581-1590 (2007).</li>
<li>Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine%3A+an+old+drug+newly+discovered%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Adenosine: an old drug newly discovered.</a> Anesthesiology. 111, 904-915 (2009).</li>
<li>Eltzschig, H. K., Eckle, T., Mager, A., Kuper, N., Karcher, C., Weissmuller, T., Boengler, K., Schulz, R., Robson, S. C., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+release+from+activated+neutrophils+occurs+via+connexin+43+and+modulates+adenosine-dependent+endothelial+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">ATP release from activated neutrophils occurs via connexin 43 and modulates adenosine-dependent endothelial cell function.</a> Circ Res. 99, 1100-1108 (2006).</li>
<li>Eltzschig, H. K., Ibla, J. C., Furuta, G. T., Leonard, M. O., Jacobson, K. A., Enjyoji, K., Robson, S. C., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+adenine+nucleotide+phosphohydrolysis+and+nucleoside+signaling+in+posthypoxic+endothelium%3A+role+of+ectonucleotidases+and+adenosine+A2B+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Coordinated adenine nucleotide phosphohydrolysis and nucleoside signaling in posthypoxic endothelium: role of ectonucleotidases and adenosine A2B receptors.</a> J Exp Med. 198, 783-796 (2003).</li>
<li>Eltzschig, H. K., Kohler, D., Eckle, T., Kong, T., Robson, S. C., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+role+of+Sp1-regulated+CD39+in+hypoxia%2Fischemia+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Central role of Sp1-regulated CD39 in hypoxia/ischemia protection.</a> Blood. 113, 224-232 (2009).</li>
<li>Frick, J. S., MacManus, C. F., Scully, M., Glover, L. E., Eltzschig, H. K., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+adenosine+A2B+receptors+to+inflammatory+parameters+of+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Contribution of adenosine A2B receptors to inflammatory parameters of experimental colitis.</a> J Immunol. 182, 4957-4964 (2009).</li>
<li>Grenz, A., Eckle, T., Zhang, H., Huang, D. Y., Wehrmann, M., Kohle, C., Unertl, K., Osswald, H., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+hanging-weight+system+for+isolated+renal+artery+occlusion+during+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of a hanging-weight system for isolated renal artery occlusion during ischemic preconditioning in mice.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 292, 475-485 (2007).</li>
<li>Grenz, A., Osswald, H., Eckle, T., Yang, D., Zhang, H., Tran, Z. V., Klingel, K., Ravid, K., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Reno-Vascular+A2B+Adenosine+Receptor+Protects+the+Kidney+from+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Reno-Vascular A2B Adenosine Receptor Protects the Kidney from Ischemia.</a> PLoS Medicine. 5, e137-e137 (2008).</li>
<li>Grenz, A., Zhang, H., Eckle, T., Mittelbronn, M., Wehrmann, M., Kohle, C., Kloor, D., Thompson, L. F., Osswald, H., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+ecto-5%27-nucleotidase+%28CD73%29+in+renal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Protective role of ecto-5'-nucleotidase (CD73) in renal ischemia.</a> J Am Soc Nephrol. 18, 833-845 (2007).</li>
<li>Grenz, A., Zhang, H., Hermes, M., Eckle, T., Klingel, K., Huang, D. Y., Muller, C. E., Robson, S. C., Osswald, H., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+E-NTPDase1+%28CD39%29+to+renal+protection+from+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Contribution of E-NTPDase1 (CD39) to renal protection from ischemia-reperfusion injury.</a> FASEB J. 21, 2863-2873 (2007).</li>
<li>Grenz, A., Zhang, H., Weingart, J., von Wietersheim, S., Eckle, T., Schnermann, J. B., Kohle, C., Kloor, D., Gleiter, C. H., Vallon, V., Eltzschig, H. K., Osswald, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+effect+of+extracellular+adenosine+generation+and+signalling+on+renal+erythropoietin+secretion+during+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lack of effect of extracellular adenosine generation and signalling on renal erythropoietin secretion during hypoxia.</a> Am J Physiol Renal Physiol. , (2007).</li>
<li>Haeberle, H. A., Durrstein, C., Rosenberger, P., Hosakote, Y. M., Kuhlicke, J., Kempf, V. A., Garofalo, R. P., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen-independent+stabilization+of+hypoxia+inducible+factor+%28HIF%29-1+during+RSV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Oxygen-independent stabilization of hypoxia inducible factor (HIF)-1 during RSV infection.</a> PLoS ONE. 3, e3352-e3352 (2008).</li>
<li>Hart, M. L., Gorzolla, I. C., Schittenhelm, J., Robson, S. C., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SP1-dependent+induction+of+CD39+facilitates+hepatic+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">SP1-dependent induction of CD39 facilitates hepatic ischemic preconditioning.</a> J Immunol. 184, 4017-4024 (2010).</li>
<li>Hart, M. L., Henn, M., Kohler, D., Kloor, D., Mittelbronn, M., Gorzolla, I. C., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+extracellular+nucleotide+phosphohydrolysis+in+intestinal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Role of extracellular nucleotide phosphohydrolysis in intestinal ischemia-reperfusion injury.</a> FASEB J. 22, 2784-2797 (2008).</li>
<li>Hart, M. L., Jacobi, B., Schittenhelm, J., Henn, M., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+Edge%3A+A2B+Adenosine+receptor+signaling+provides+potent+protection+during+intestinal+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting Edge: A2B Adenosine receptor signaling provides potent protection during intestinal ischemia/reperfusion injury.</a> J Immunol. 182, 3965-3968 (2009).</li>
<li>Hart, M. L., Kohler, D., Eckle, T., Kloor, D., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+treatment+of+mouse+or+human+blood+with+soluble+5%27-nucleotidase+inhibits+platelet+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct treatment of mouse or human blood with soluble 5'-nucleotidase inhibits platelet aggregation.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 1477-1483 (2008).</li>
<li>Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C., Schittenhelm, J., Kloor, D., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+adenosine+production+by+ecto-5%27-nucleotidase+protects+during+murine+hepatic+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Extracellular adenosine production by ecto-5'-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning.</a> Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).</li>
<li>Hart, M. L., Much, C., Kohler, D., Schittenhelm, J., Gorzolla, I. C., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+hanging-weight+system+for+liver+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of a hanging-weight system for liver ischemic preconditioning in mice.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 294, 1431-1440 (2008).</li>
<li>Hartmann, H., Eltzschig, H. K., Wurz, H., Hantke, K., Rakin, A., Yazdi, A. S., Matteoli, G., Bohn, E., Autenrieth, I. B., Karhausen, J., Neumann, D., Colgan, S. P., Kempf, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-independent+activation+of+HIF-1+by+enterobacteriaceae+and+their+siderophores%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-independent activation of HIF-1 by enterobacteriaceae and their siderophores.</a> Gastroenterology. 134, 756-767 (2008).</li>
<li>Heinzelmann, F., Jendrossek, V., Lauber, K., Nowak, K., Eldh, T., Boras, R., Handrick, R., Henkel, M., Martin, C., Uhlig, S., Kohler, D., Eltzschig, H. K., Wehrmann, M., Budach, W., Belka, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irradiation-induced+pneumonitis+mediated+by+the+CD95%2FCD95-ligand+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Irradiation-induced pneumonitis mediated by the CD95/CD95-ligand system.</a> J Natl Cancer Inst. 98, 1248-1251 (2006).</li>
<li>Koeppen, M., Eckle, T., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+deletion+of+the+A1+adenosine+receptor+abolishes+heart-rate+slowing+effects+of+intravascular+adenosine+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Selective deletion of the A1 adenosine receptor abolishes heart-rate slowing effects of intravascular adenosine in vivo.</a> PLoS One. 4, e6784-e6784 (2009).</li>
<li>Kohler, D., Eckle, T., Faigle, M., Grenz, A., Mittelbronn, M., Laucher, S., Hart, M. L., Robson, S. C., Muller, C. E., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD39%2Fectonucleoside+triphosphate+diphosphohydrolase+1+provides+myocardial+protection+during+cardiac+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">CD39/ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 provides myocardial protection during cardiac ischemia/reperfusion injury.</a> Circulation. 116, 1784-1794 (2007).</li>
<li>Kuhlicke, J., Frick, J. S., Morote-Garcia, J. C., Rosenberger, P., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+Inducible+Factor+%28HIF%29-1+Coordinates+Induction+of+Toll-Like+Receptors+TLR2+and+TLR6+during+Hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Hypoxia Inducible Factor (HIF)-1 Coordinates Induction of Toll-Like Receptors TLR2 and TLR6 during Hypoxia.</a> PLoS ONE. 2, e1364-e1364 (2007).</li>
<li>Morote-Garcia, J. C., Rosenberger, P., Kuhlicke, J., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIF-1-dependent+repression+of+adenosine+kinase+attenuates+hypoxia-induced+vascular+leak%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">HIF-1-dependent repression of adenosine kinase attenuates hypoxia-induced vascular leak.</a> Blood. 111, 5571-5580 (2008).</li>
<li>Morote-Garcia, J. C., Rosenberger, P., Nivillac, N. M., Coe, I. R., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor-dependent+repression+of+equilibrative+nucleoside+transporter+2+attenuates+mucosal+inflammation+during+intestinal+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor-dependent repression of equilibrative nucleoside transporter 2 attenuates mucosal inflammation during intestinal hypoxia.</a> Gastroenterology. 136, 607-618 (2009).</li>
<li>Reutershan, J., Vollmer, I., Stark, S., Wagner, R., Ngamsri, K. C., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+and+inflammation%3A+CD39+and+CD73+are+critical+mediators+in+LPS-induced+PMN+trafficking+into+the+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Adenosine and inflammation: CD39 and CD73 are critical mediators in LPS-induced PMN trafficking into the lungs.</a> FASEB J. 23, 473-482 (2009).</li>
<li>Schingnitz, U., Hartmann, K., Macmanus, C. F., Eckle, T., Zug, S., Colgan, S. P., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+through+the+A2B+adenosine+receptor+dampens+endotoxin-induced+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Signaling through the A2B adenosine receptor dampens endotoxin-induced acute lung injury.</a> J Immunol. 184, 5271-5279 (2010).</li>
<li>Thompson, L. F., Eltzschig, H. K., Ibla, J. C., Van De Wiele, C. J., Resta, R., Morote-Garcia, J. C., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+for+ecto-5%27-nucleotidase+%28CD73%29+in+vascular+leakage+during+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Crucial role for ecto-5'-nucleotidase (CD73) in vascular leakage during hypoxia.</a> J. Exp. Med. 200, 1395-1405 (2004).</li>
<li>Aherne, C. M., Kewley, E. M., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+resurgence+of+A2B+adenosine+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">The resurgence of A2B adenosine receptor signaling.</a> Biochim Biophys Acta. , (2010).</li>
<li>Eckle, T., Koeppen, M., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+extracellular+adenosine+in+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Role of extracellular adenosine in acute lung injury.</a> Physiology (Bethesda). 24, 298-306 (2009).</li>
<li>Koeppen, M., Feil, R., Siegl, D., Feil, S., Hofmann, F., Pohl, U., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cGMP-dependent+protein+kinase+mediates+NO-+but+not+acetylcholine-induced+dilations+in+resistance+vessels+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">cGMP-dependent protein kinase mediates NO- but not acetylcholine-induced dilations in resistance vessels in vivo.</a> Hypertension. 44, 952-955 (2004).</li>
</ol>

המחקר הנוכחי מתאר טכניקה של ביצוע ההנשמה-Induced פגיעה ריאות בעכברים. מודל זה מדגים פגיעה לשעתקו מאוד בשל אוורור בלחץ גבוה. חוקרים הרואים בלימוד פציעה ריאות חריפה, בעכברים עשויים להפיק תועלת ממודל זה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> נתרן Pentobarbital (פלוס קטלניות) </td><td> Vortech Ls פרמצבטיות בע&quot;מ, </td><td> VPL 9372 </td><td> 4mg/mL ב מלוחים </td></tr><tr><td> Insyte 22 G </td><td> Beckton דיקינסון </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> תפר, משי 4.0 </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 517698 </td><td></td></tr><tr><td> תפר, Prolene 8.0 </td><td> Ethicon, ארה&quot;ב </td><td> M8739 </td><td> לשימוש חוזר </td></tr><tr><td> סימנס 900 ° C </td><td> DRE וטרינרית, ארה&quot;ב </td><td> # 336 </td><td> שיפוץ </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ לנתח (SZX10) </td><td> אולימפוס </td><td> n / a </td><td> לשקול ומרחק עבודה נדיבה </td></tr><tr><td> חימום טבלה </td><td> RT, Effenberger, גרמניה </td><td> n / a </td><td> רק ספק אחד </td></tr><tr><td> לחץ דם במכשיר </td><td> Sense Cyber, Inc </td><td> BPM02 </td><td></td></tr><tr><td> אני STAT </td><td> אבוט </td><td> n / a </td><td></td></tr></tbody></table>

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

מודלים Murine נמצאים בשימוש נרחב לחקור פציעות חריפה של מערכות ואיברים שונים (1-34). פציעה ריאות חריפה (עלי), אשר מתרחשת עם להנשמה מלאכותית ממושכת, תורמת התחלואה והתמותה של מחלה קריטית, מחקרים על מטרות גנטי או תרופתי הרומן הם אזורים של חקירה אינטנסיבית (1-3, 5, 8, 26, 30, 33 -36). ALI מוגדרת על ידי התפרצות חריפה של המחלה, אשר מוביל בצקת שאינם לב ריאתי ליקוי הבאות של ריאתי גז החליפין (36). פיתחנו מודל Murine של עלי באמצעות אוורור לחץ שבשליטת לגרום ההנשמה-Induced פגיעה ריאה (2). למטרה זו, עכברים C57BL / 6 מורדמים ו ההנשמה מתבצעת ואחריו אינדוקציה של עלי באמצעות אוורור מכני. עכברים הם מאוורר בקביעת הלחץ שבשליטת עם הלחץ inspiratory שיא של 45 mbar מעל 1 - 3 שעות. כפי פרמטרים התוצאה, בצקת ריאות (רטוב על יבש יחס), תוכן נוזל ברונכואלוואולרית אלבומין, נוזל ברונכואלוואולרית ותוכן ריאתי myeloperoxidase רקמות חילוף הגזים ריאתי מוערכים (2). באמצעות טכניקה זו נוכל להראות שזה מספיק גורם לדלקת ריאות חריפה יכולה להבחין בין קבוצות הטיפול השונות או גנוטיפים (1-3, 5). לכן טכניקה זו עשויה לסייע לחוקרים מי לרדוף המנגנונים המולקולריים המעורבים עלי באמצעות גישה גנטיות בעכברים עם מחיקת הגן במיקוד.

מודל Murine לפגיעה ריאות הנגרמת ההנשמה הוא כלי חשוב ללמוד פציעה ריאות חריפה<em&gt; In vivo</em&gt;. כאן אנו מדווחים החלים קל<em&gt; באתרו</em&gt; מודל פציעה ריאות חריפה שימוש בלחץ גבוה להנשמה מלאכותית כדי לגרום לכישלון חריף של הריאה.

מודלים של עכברים משמשים באופן נרחב לחקר פגיעות חריפות של מערכות איברים שונות (1-34). פגיעה ריאתית חריפה (ALI), המתרחשת בעקבות...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להשרות פגיעה ריאתית בעכברים באמצעות מאוורר. הדבר משיג על ידי ביצוע טרכאוטומיה והגשת הנשמה מכנית בלחץ גבוה. לאחר מכן, מוחדר קטטר לעורק התרדמה (carotid artery) למדידת פרמטרים המודינמיים.לאחר שהחיה שהתה במנשם זמן רב מספיק כדי להשרות פגיעה ריאתית, נלקחים דגימות דם עורקי ובחור של נוזל שטיפת ברונכ׳י-אלבולארית. השלב האחרון של הפרוצדורה הוא קצירת רקמת ריאה לצורך ניתוח המשך. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המקשרות בין השינויים בדגימות שנאספו לבין משך ההנשמה המכנית.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון שאיפת LPS, הוא שהיא משרה פגיעה ריאתית חריפה, הדומית לכל המאפיינים העיקריים של תסמונת הגנרטור הנשימי החריף (ARDS) הנמצאת בבני אדם. לתחילת הפעולה, הנח עכבר מורדם בתנוחה גבית על שולחן חימום בבקרה תרמית, קשור חומר תפירה סביב כל גפה, ולאחר מכן הדבק את התפרים לשולחן. לאחר מכן, קבע את הראש במקומו על ידי העברת תפר מתחת לשיניים העליונות.הנח בולוס של תמיסת סלין בנפח של 500 µL והחדר פרוב רקטלי המחובר לבקר משוב תרמי כדי להבטיח שטמפרטורת הגוף תישאר ב-37 °C. לאחר ההכנה, ניתן לכסות את העכבר בשמן מינרלי כדי להפחית את החשיפה לאלרגנים מהפרווה. לבסוף, עטוף את בעל החיים בניילון נצמד זמין מסחרית כדי לסייע בשמירה על טמפרטורת הגוף.כדי לחשוף את הקנה, בצעו חתך לאורך הצוואר והפרידו בעזרת דיסקציה קהה את השרירים ורקמת החיבור שסביבו. מקמו שתי תפרים כירורגיים באורך 10 סנטימטרים מתחת לקנה, במרחק של כסנטימטר זה מזה. השתמשו במספריים מסוג mc first ו-Vanna כדי לחתוך בזהירות את הקנה בין שתי טבעות סמכות, כ-3 עד 4 מילימטרים מתחת לגרון.להשלמת האינטובציה, הכניסו את קצהו של קנולה פוליאתילן קהה בזווית של 85 מעלות אל תוך הקנה. לאחר מכן, הוטו את הקנולה כך שתהיה בקו אחד עם חלל הקנה. התקדמו באיטיות עם הצינור עד שהקצה ייעלם בתוך מפתח בית החזה.קבעו את הפיתול במקומו באמצעות שתי התפרים הכירורגיים שהוצבו קודם לכן תחת הקנה. לבסוף, חברו את הפיתול למנשם. פגיעה ריאתית מושרית באמצעות מכשיר servo 900 C מבית Siemens.באמצעות טכניקת הנשמה בבקרת לחץ, הגדירו את שיא לחץ השאיפה ל-45 millibars בתדירות של 80 נשימות לדקה, ולחץ פעימי חיובי בסוף נשיפה (PEEP) של אפס עד שלושה millibars, כאשר חלקו של החמסן מהחמצן השאיף שווה ל-1, ויחס השאיפה לנשיפה הוא 1:1. לאחר חיבור מוצלח של בעל החיים למנשם, מוחדר קטטר לעורק הת carotid למדידת לחץ הדם וקצב הלב. אם הזרוע תחובר תחילה לצד הגוף, ייחשף קטע ארוך יותר של העורק.התחילו בביצוע דיסקציה קהה של השרירים הפארה-טרכיאליים כדי לחשוף את העורק הקרוטיס. לאחר בידודו, קשרו תפר בקצה הפרוקסימלי של העורק ואבטחו אותו באמצעות קלמפ או סרט הדבקה. מקמו תפר שני במרחק של כסנטימטר אחד מהראשון וקשרו אותו, אך אל תהדקו את התפר סביב העורק. בצעו דיסקציה של העורק עד לקצה הדיסטלי ביותר והניחו קלמפ קטן כדי למנוע איבוד דם.השתמשו במיקרו-מספריים כדי לבצע פתח אלכסוני קטן בעורק מעל התפר השני. החזיקו את הפתח בעזרת פינצטה עדינה תוך כדי הכנסת הקטטר, והדקו את הקשר כדי לקבעו במקומו. לאחר מכן, שחררו את התסבך והעבירו את הקטטר קדימה.העבירו את הקטטר מעבר לתפר השני. הדקו את הקטטר באמצעות מספר קשרים וסרט הדבקה. לאחר שהקטטר במקומו, מזגו תמיסת סליין נורמלית בקצב של 0.1 milliliter לשעה, וחברו אותו למכשיר למדידת לחץ דם.לבסוף, חברו תפסים לקצוות הגפיים כדי לנטר את קצב הלב. לאחר שלוש שעות של הנשמה מכנית, נאספים דגימות כדי למדוד את היקף הפגיעה הריאתית. ראשית, אספו דגימות מקטטר עורק התרדמה (carotid artery) לצורך אנליזת גזים בדם.לאחר העמקת רמת ההרדמה, נתק את החיבור מהמנשם והחדר מזרק מלא במילליטר אחד של phosphate buffered saline. דחף את תכולת המזרק והמתן שלוש שניות לפני איסוף נוזל שטיפת הסימפונות והנשמות (bronchoalveolar lavage fluid) חזרה אל תוך המזרק. יש לשים לב כי הנפח המוחזר צריך להיות נמוך משמעותית ממילליטר אחד. שטיפה.הקפיאו את נוזל שטיפת הסימפונות והנשימה (bronchoalveolar lavage fluid) בחנקן נוזלי ואחסנו במינוס 80 מעלות צלזיוס. כדי לבודד את הריאות, בצעו תחילה חתך מיד מתחת לעצם השטרנום (sternum). החזיקו את השטרנום בעזרת פינצטה והרחיבו את החתך לאורך כלוב הצלעות. לאחר מכן, חתכו את הסרעפת בקצוות ובמרחק מהצלעות כדי לחשוף מבט ברור אל הפתח התחתון של בית החזה.הרם את עצם השטרנום באמצעות פינצטה ופתח את בית החזה באמצעות חיתוכים ארוכים בצד ימין ובצד שמאל, תוך שמירה על חיתוכים לטרליים ככל האפשר, כך שניתן יהיה להסיט את כל דופן בית החזה הקדמית כלפי מעלה. חבר מחט במידה 27.5 למזרק מלא ב-5 mL של PBS. הכנס את המחט לחדר ימין ושטוף את מחזור הדם העורקי עד שהריאות יהפכו ללבנות לחלוטין.אם הדבר אינו קורה, ודאו שקצה המחט ממוקם נכון בחדר הימני ומקמו אותו מחדש במידת הצורך. הסִירו את הריאות ואת הבלוק על ידי משיכת הלב כלפי מעלה וחיתוך הקנה. השתמשו בנייר סופג כדי לספוג דם המסיע את השדה הראוי.משכו את הלב לכיוון הבטן וגזרו בזהירות לאורך עמוד השדרה כדי לשחרר את כל איברי בית החזה. גזרו את האורטה והניחו את איברי בית החזה על שולחן ניתוח נקי. גזרו את הלב מהשאר ונקו כל כלי דם מרכזי מהדגימה.וודאו שאין רקמת תימוס שעדיין מחוברת לריאה. הפר את אונות הריאות, הנח אותן במבחנות נפרדות, הקפא אותן בהקפאה מהירה (snap freeze) ואחסן בטמפרטורה של 80°C- עבור ניתוחים המשכיים.כפי שניתן לראות כאן, תכולת החלבון בנוזל שטיפת ברונכ׳יאולבלי (bronchoalveolar lavage fluid) עולה עם משך ההנשמה. השינוי היחסי בתכולת החלבון מוצג כנורמליזציה לאפס שעות הנשמה כדי להעריך את היקף הפגיעה הריאתית. נבצעו בדיקות ELISA עבור אלבומין ומיאלופרוקסידאז (Myla peroxidase), ותאי הדלקת בנוזל ה-BL נספרו.

pressure-controlled-ventilation-to-induce-acute-lung-injury-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פרוטוקול זה גורם לפגיעה ריאתית חריפה בעכבר שיש לו נאמנות קרובה לפתוגנזה של דלקת ריאות חומצית שנצפתה בבני אדם. אנו מייצרים פגיעה ריאתית חריפה לא קטלנית עם pH נמוך ומביאים בחשבון הבדלים במבנה הנשימה האנטומי של מכרסמים ובני אדם באמצעות טרכאוסטומיה פתוחה יחד עם שחרור לחץ היקפי.

להרחיב הנשמת קיבת חומצה שאיפת Murine הדגם של פגיעה החריפה ריאות תוצאות ב מקסימלי חריפה קטלנית פגיעת ריאות

הציג כאן הוא צעד אחר צעד הליך כדי לגרום לפציעה ריאה חריפה בעכברים על ידי ישירה intratracheal ליפוסכאלפסיד ולבצע ניתוח FACS של דגימות דם, ברונמכתשי נוזל ששטיפה, ורקמות ריאות. מיניציה מינימלית, טיפול פשוט, תוכנות טובה, ו טיטור של חומרת המחלה הם יתרונות של גישה זו.

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה

הטיות סלקטיבית של חומצת הסימפונות לריאה השמאלית בעכברים גורמת לפגיעה בריאה חד צדדית ועצמית מוגבלת, אשר מודלים תסמונת מצוקה נשימתית חריפה של האדם (ברווזים) הנגרמת על ידי שאיפה חומצת קיבה.

מודל של פגיעה עצמית מוגבלת בריאה חריפה על ידי ברונכיט חד צדדית של חומצה בסימפונות

אוזון משולב ועכברים חשופים אנדוטוקסין חיידקי מראים מוות תאי נרחב, כולל זה של נויטרופילים. ראינו התאמות תאיות כגון שיבוש של lamellipodia ציטוסלטל, ביטוי תאי מוגבר של subunit סינתאז V ATP מורכב β ואנגיוסטין בשטיפת ברונכו-מכתשית, דיכוי התגובה החיסונית ריאות וגיוס נויטרופילים מעוכבים.

הדמיה של התאמות תאיות ריאות במהלך אוזון משולב ו- LPS המושרה פגיעה ריאות חריפה מורין

שילוב של שטיפה פעילי שטח באמצעות 0.9% מלוחים (35 מ"ל / קילוגרם משקל גוף, 37 °C) ואוורור נפח גאות ושפל גבוה עם מציצה נמוכה כדי לגרום לפגיעה ריאות הנגרמת על ידי מכונת הנשמה בינונית (VILI) תוצאות תסמונת מצוקה נשימתית חריפה ניסיונית (ARDS). שיטה זו מספקת מודל של פגיעה בריאות עם יכולת גיוס נמוכה /מוגבלת ללמוד את ההשפעה של אסטרטגיות אוורור שונות לתקופות ממושכות.

דלדול פעילי שטח בשילוב עם אוורור מזיק גורם למודל רבייה של תסמונת מצוקה נשימתית חריפה (ARDS)

ניתן להשתמש במיקרוסקופיה פלואורסצנטית תוך-ורידית כדי לחקור אינטראקציות לויקוציטים-אנדותל וזלוף נימי בזמן אמת. פרוטוקול זה מתאר שיטות לדמות ולכמת פרמטרים אלה במיקרו-סירקולציה ריאתית באמצעות מערכת הדמיית ריאות המיוצבת בריק.

מיקרוסקופיה פלואורסצנטית תוך-ורידית של מיקרו-סירקולציה ריאתית בפגיעה חריפה ניסיונית של הריאות באמצעות מערכת הדמיה מיוצבת ואקום

כתב יד זה מתאר את ביסוס מודל זיהומי של דלקת ריאות בעכברים ואת אפיון פתרון הפגיעה בהתאמה יחד עם שיטות לגידול חיידקים והחדרה תוך טרכיאלית. מתוארת גם גישה חדשנית המשתמשת בציטומטריית זרימה בממד גבוה להערכת הנוף החיסוני.

מודל ניסיוני להערכת רזולוציה של דלקת ריאות

מודל ניתוחי בעכבר ליצירת פגיעה באיסכמיה של הריאה השמאלית (IR) תוך שמירה על אוורור והימנעות מהיפוקסיה.

מודל עכברי של אינטובציה אורוטרכאלית וניתוח איסכמיה ריאה מונשמת

כאן, אנו מציעים פרוטוקול להעברת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי (LPS) באמצעות אינטובציה אנדוטרכאלית אורופרכאלית לא פולשנית. שיטה זו ממזערת את הטראומה של ההליך הכירורגי עבור החיה ומעבירה LPS מדויק לקנה הנשימה ולאחר מכן לריאות.

החדרת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי לא פולשני בעכברים

פרוטוקול זה מתאר את הפיתוח של מודל חזרזיר יילודים של פגיעה ריאתית חריפה המדגים אירועים פתוגניים מוקדמים המתרחשים בריאה המוקדמת, כולל כמות פעילי שטח תת-מספקת, היפראוקסיה, אוורור בלחץ גבוה ודלקת, כדי להקל על הבנת הטריגרים המולקולריים של דיספלזיה ברונכופולמונרית ולשפר את התרגום הטיפולי.

פיתוח מודל פגיעת ריאות חריפה של חזרזיר יילודים המשחזר את הסביבה המוקדמת של ריאות פגים

במחקר זה, טכניקת החדרה אנדוטרכיאלית לא פולשנית הוכחה כמפתחת ALI בעכברים באמצעות לרינגוסקופ בסיסי להבטחת העברת LPS מדויקת לריאות. ה-LPS מושתל דרך צינור אנדוטרכיאלי באמצעות לרינגוסקופ. גודל הפגיעה בריאתיות מוערך במספר נקודות זמן.

מתן לא פולשני של ליפופוליסכריד באנדוטרכיה כדי לגרום לפגיעה ריאתית חריפה אצל מכרסמים

למדו כיצד לגרום פגיעה ריאות חריפה בעכברים באמצעות אוורור מכני בלחץ גבוה. שיטה זו מאפשרת איסוף דגימות דם ונוזלי שטיפה ברונכואלוולריים לניתוח מנגנוני הפגיעה.

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

גלה סרטונים נוספים