Name: הערכת נכסים איתות של Ectodermal epithelia במהלך פיתוח Craniofacial (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-24T11:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: חקור שיטת השתלת רקמה ליצירת עוברים כימריים לחקר תכונות האיתות של אקטודרם צפאלי בפיתוח קרניו-פאציאלי. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מולקולרי ומורפולוגי של תפקוד הרקמה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי R01-R01 DE018234 ו-DE019638.

1. הכנת רקמות התורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן התקשורת לתרבות, לחדד סיכות זכוכית, לחדד מחטים טונגסטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף העובר מן המעטפת, להתרחץ קר כקרח PBS. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מזרק 10 מ"ל ו - 18 מחט מד להסיר 1.0 מ"ל של אלבומין מהקצה המחודד של מעטפת הביצית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושים חור קטן בחלק העליון של הקליפה באמצעות נקודת מספריים, ולאחר מכן לחתוך פתח עגול לחשוף את העובר </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הראש אל המקום DMEM (נסיוב בחינם, בטמפרטורת החדר) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח תהליכים Frontonasal מעובר (או לאתר תורם אחרים, כגון תהליך לסתי או mandibular) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקציר ב 2.4U / mL dispase ב PBS על הקרח עבור 20mins </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כיסוי רקמות עם DMEM עם BSA 1% כדי לעצור העיכול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במחט טונגסטן חידד את האאקטודרם mesenchyme נפרד, ו neuroectoderm </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות רקמת שתל ב BSA DMEM 1% על הקרח עד מארח מוכן להשתלה </li></ol> 2. הכנת מארח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את העובר <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מזרק 10 מ"ל ו - 18 מחט מד להסיר 1.0 מ"ל של אלבומין מהקצה המחודד של מעטפת הביצית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושים חור קטן בחלק העליון של הקליפה באמצעות נקודת מספריים. מניחים נייר דבק על החור, ולאחר מכן לחתוך פתח עגול לחשוף את העובר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש 2 זוגות מלקחיים, לתפוס את amnion בעדינות דמעה לעשות חור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובב את ראשו על ידי הנחת זוג מלקחיים על עין ימין ועל הפעלת לחץ. בעוד מחזיק את הראש יציב, להשתמש במחט טונגסטן להסיר את האאקטודרם לארח כדי להתאים את השתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את השתל לארח בעזרת פיפטה מזכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקום השתל להחליף את האאקטודרם הוסרו. הכנס סיכה זכוכית בכל פינה של הרקמה מורכבים להצמיד את השתל במקום. כדי להפוך את סיכות זכוכית, למשוך צינור microcapillary לנקודה קנס על אש אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום קלטת בחוזקה מעל החור ולהחזיר העובר אל האינקובטור לאורך זמן מתאים לניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראה גם: 9 </li></ol> 3. נציג תוצאות: כדי להעריך מפלצות, עוברים יש לאסוף ולעבד לניתוח ההתפלגות של המארח רקמות התורם. עבור זיהוי של תאים שליו, אימונוהיסטוכימיה באמצעות נוגדן QcPN (המתואר: 3) הוא מועסק, וכן עבור זיהוי של תאים בעכבר, ב הכלאה באתרו על סעיפים פרפין משמש 6. תאים התורם צריך להיות מוגבל האפיתל, ולא צריך להיות שום עדות של רקמות התורם mesenchymal (איור 1). נוכחות של תאים מתורם בודד mesenchyme מצביע על נוכחות של תאים עצביים לפסגה זיהום אשר לבלבל כל פרשנות מורפולוגיים בשל השפעתם של תאים אלה על היבטים רבים של פיתוח פנים (למשל, 10). לאחר משוכנע כי הטכניקה שתל ללא זיהום mesenchyme, מדדי התוצאה מורפולוגי נוסף או מולקולרית ניתן להשתמש כדי להעריך את מפלצות. לענייננו, זיהינו את נוכחותו של סחוסים ועצמות מחוץ לרחם כי תאמו כפילויות של הלסת העליונה שהיו המושרה על ידי רקמות להשתלה (איור 2), ואת השינויים המולקולריים ברקמות mesenchymal בתגובה האאקטודרם מורכבים (איור 3) 5,6. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. הערכת chimerism (א) נגד QcPN מכתים משמש כדי לזהות תאים שלווים שלווים, חומוס מפלצות. אין ראיות של מכתים ב mesenchyme. (ב) הכלאה באתרו משמש כדי לזהות את הביטוי של תעתיקים B2 סינוס ב עכבר חומוס מפלצות. הביטוי מוגבל האאקטודרם המרכיבים את השתל. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. מכתים Trichrome מראה שכפול של השלד הלסת העליונה הכימרה (א) שליו, חומוס, ו (ב) עכבר חומוס מפלצות. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> איור 3. האאקטודרם regultes ביטוי גנים mesenchyme. (א) הביטוי רגיל Bmp7 ב mesenchyme של עובר אפרוח (רדיואקטיביים הכלאה באתרו עם אדום אות חיובי פסאודו בצבע ב Adobe Photoshop). (ב) הוא ביטוי Bmp7 המושרה mesenchyme הסמוך השתל (חץ) בעוברים chimeric.

<ol><li>Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+the+Neural+Crest+in+Patterning+of+Avian+Cranial+Skeletal%2C+Connective%2C+and+Muscle+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The Role of the Neural Crest in Patterning of Avian Cranial Skeletal, Connective, and Muscle Tissues.</a> Developmental Biology. 96, 144-144 (1983).</li>
<li>Bronner-Fraser, M., Stern, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Mesodermal+Tissues+on+Avian+Neural+Crest+Cell+Migration%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Effects of Mesodermal Tissues on Avian Neural Crest Cell Migration.</a> Developmental Biology. 143, 213-213 (1991).</li>
<li>Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+can+form+cartilages+normally+derived+from+mesoderm+during+development+of+the+avian+head+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neural crest can form cartilages normally derived from mesoderm during development of the avian head skeleton.</a> Developmental Biology. 208, 441-441 (1999).</li>
<li>Couly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+Hox-negative+cephalic+neural+crest+cells+and+the+foregut+endoderm+in+patterning+the+facial+skeleton+in+the+vertebrate+head%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Interactions between Hox-negative cephalic neural crest cells and the foregut endoderm in patterning the facial skeleton in the vertebrate head.</a> Development. 129, 1061-1061 (2002).</li>
<li>Evans, D. J., Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+relations+between+avian+craniofacial+neural+crest+and+paraxial+mesoderm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Spatial relations between avian craniofacial neural crest and paraxial mesoderm cells.</a> Dev Dyn. , (2006).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+zone+of+frontonasal+ectoderm+regulates+patterning+and+growth+in+the+face%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A zone of frontonasal ectoderm regulates patterning and growth in the face.</a> Development. 130, 1749-1749 (2003).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+organization+of+the+frontonasal+ectodermal+zone+in+birds+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Unique organization of the frontonasal ectodermal zone in birds and mammals.</a> Dev Biol. 325, 200-200 (2009).</li>
<li>Le Lièvre, C. S., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+derivatives+of+the+neural+crest%3A+analysis+of+chimaeric+quail+and+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Embryology+and+Experimental+Morphology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal derivatives of the neural crest: analysis of chimaeric quail and chick embryos.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 34, 125-125 (1975).</li>
<li>Bollag, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+repetitive+mouse+B2+element+to+identify+transplanted+mouse+cells+in+mouse-chick+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Use of a repetitive mouse B2 element to identify transplanted mouse cells in mouse-chick chimeras.</a> Exp Cell Res. 248, 75-75 (1999).</li>
<li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Windowing+chicken+eggs+for+developmental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Windowing chicken eggs for developmental studies.</a> J Vis Exp. , (2007).</li>
<li>Eames, B. F., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quail-duck+chimeras+reveal+spatiotemporal+plasticity+in+molecular+and+histogenic+programs+of+cranial+feather+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Quail-duck chimeras reveal spatiotemporal plasticity in molecular and histogenic programs of cranial feather development.</a> Development. 132, 1499-1499 (2005).</li>
<li>Odent, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Sonic+hedgehog+%28SHH+%29+gene+during+early+human+development+and+phenotypic+expression+of+new+mutations+causing+holoprosencephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Expression of the Sonic hedgehog (SHH ) gene during early human development and phenotypic expression of new mutations causing holoprosencephaly.</a> Hum Mol Genet. 8, 1683-1683 (1999).</li>
<li>Szabo-Rogers, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+skeletogenic+patterning+roles+for+the+olfactory+pit%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Novel skeletogenic patterning roles for the olfactory pit.</a> Development. 136, 219-219 (2009).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

באמצעות שיטה זו השתלת אפשרה לנו לקבוע כי האאקטודרם מכיל מידע איתות המווסת את הקוטביות dorsoventral והסיומת proximodistal של הלסת העליונה. הדמיון של תוצאות בעת שימוש שליו או האאקטודרם העכבר השימור של אותות מולקולריים ברקמה זו בקרב מינים רבים 6,11 מציין כי מדובר במרכז איתות שמור ביותר בקרב בעלי החוליות. יתר על כן, חוקרים אחרים השתמשו בטכניקות דומות כדי לבדוק את המאפיינים של איתות באזורים שונים של פני השטח האאקטודרם cephalic ו חשפו את נוכחותו של מרכזי איתות מרובים הממוקמים...

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>Tektronix, Inc.</td><td>TEKZR114</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>University of California - San Francisco</td><td>CCFDA003</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי 35x10 mm</td><td>Falcon BD</td><td>1008</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה Dumont מס' 5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>מספרי קפיץ</td><td>Fine Science Tools</td><td>15010-11</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>Fine Science Tools</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>מחט טונגסטן</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000</td><td></td></tr><tr><td>צינור מיקרו-קפילרי</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-225-G</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פסטור</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-6B</td><td></td></tr><tr><td>מספרי קפיץ</td><td>Fine Science Tools</td><td>15010-11</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק להב</td><td>Fine Science Tools</td><td>10052-11</td><td></td></tr><tr><td>להב תער</td><td>Fine Science Tools</td><td>10050-00</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכת נכסים איתות של ectodermal epithelia במהלך פיתוח craniofacial

Assessing Signaling Properties of Ectodermal Epithelia During Craniofacial Development

הנגישות של עוברי העופות סייע embryologists ניסיוני להבין את גורלם של תאים במהלך ההתפתחות ואת תפקידו של אינטראקציות רקמות המווסתים דפוסים המורפוגנזה של בעלי חוליות (לדוגמה: 1, 2, 3, 4). כאן, אנו ממחישים שיטה זו מנצלת את הנגישות כדי לבדוק את איתות ותכונות דפוסים של רקמות ectodermal במהלך התפתחות הפנים. בניסויים אלו, אנו יוצרים שליו, חומוס 5 או עכבר חומוס 6 מפלצות ידי השתלת האאקטודרם משטח cephalic המכסה את הלסת העליונה של שליו או בעכבר על אזור או באותו אזור או מחוץ לרחם של עוברים חומוס. השימוש שליו כמו רקמות התורם להשתלה לתוך אפרוחים פותחה על מנת לנצל את הסמן nucleolar נוכח שליו אך לא תאים חומוס, ובכך מאפשר לחוקרים להבחין מארח ורקמות תורם 7. בדומה לכך, מרכיב חוזרות נמצא גנום העכבר, והוא הביע בכל מקום בגוף, אשר מאפשר לנו להבחין המארח רקמות התורם אפרוח ועכבר מפלצות 8. השימוש האאקטודרם עכבר כמו רקמות התורם יהיה מאוד להרחיב את ההבנה שלנו של האינטראקציות הללו רקמות, כי זה יאפשר לנו לבחון את המאפיינים של איתות האאקטודרם שמקורם בעוברים מוטנטיים שונים.

מאמר זה מתאר השתלת רקמות טכניקה שנועדה לבדוק את איתות ותכונות של דפוסים האאקטודרם משטח cephalic במהלך הפיתוח craniofacial.

הערכת נכסים איתות של Ectodermal epithelia במהלך פיתוח Craniofacial

הנגישות של עוברי עופות סייעה לאמבריולוגים ניסיוניים להבין את גורלן של תאים במהלך ההתפתחות ואת תפקידם של רקמות...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא ליצור עוברים כימריים על ידי השתלת אקטודרמה מעוברים תורמים ללסת העליונה המתפתחת של עוברים של אפרוח. דבר זה מושג תחילה על ידי הסרת הדֶרמה של התורם לצורך השתלה, ולאחר מכן הכשרת אתר המאחס להשתלה.השלב הסופי של הפרוצדורה הוא הנחת רקמת התורם באתר המאחס וקיבוע השתל במקומו. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות קליטה בלעדית של אקטודרמה של תורם, ובאמצעות ניתוח מולקולרי ומורפולוגי, ניתן לקבוע את התפקוד של ה-recod derm של התורם. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בביולוגיה של ההתפתחות, כגון זיהוי תפקידן של רקמות שונות במהלך המורפוגנזה.את הפרוצדורה תדגים ד"ר Diane, חוקרת בכירה מהמעבדה שלנו. לפני תחילת הפרוצדורה, הכינו את המצעים וודאו שכל התמיסות הדרושות זמינות ובטמפרטורה הנכונה. לאחר מכן, תוך כדי ענידה של הגנה מתאימה לעיניים, משכו צינורות מיקרו-קפילריות לנקודה דקה מעל להבת אלכוהול.כדי להכין סיכות זכוכית, השחילו מחטי טונגסטן על ידי החזקתם בלהבה של מבער פרופאן. התחילו בחילוץ העובר התורם מהקליפה על ידי הנחת פיסת סרט דביק מעל קצה הביצה. לאחר מכן, השתמשו בחוד של מחט דיסקציה כדי ליצור חור קטן במרכז הסרט.החדירו מזרק של 10 מיליליטר ומחט היפודרמית במידה 18 לתוך החור, ושאבו מיליליטר אחד של אלבומין מהביצה. לאחר מכן, באמצעות מחט דיסקציה, צרו חור קטן בחלק העליון של הקליפה. הניחו פיסת סרט adhesive שנייה כדי לכסות חור זה.בצעו פתיחה מעגלית בביצה באמצעות שני זוגות פינצטות. אחזו בעובר והעבירו אותו לכלי עם PBS קר מאוד לשטיפה. לאחר הסרת ראשו של העובר, הניחו אותו בכלי לתרבית רקמות המכיל DMEM ללא סרום בטמפרטורת החדר.הנח את הצלחת תחת מיקרוסקופ נתיחה תוך כדי החזקת הראש בעזרת פינצטה. השתמש במספרי קפיץ כדי לבצע נתיחה גסה של הלסת העליונה וה-lagon משאר הראש. לאחר מכן, באמצעות ידית להב עם להב תער חד, גזור את התהליך הנחרי-מצחי (frontal nasal process) מהלסת העליונה.השתמש בפ pipette כדי להעביר את ה-fronton nasal process לתוך צלחת פטרי של 30 מילימטר המכילה נפח מספיק של diss ב-PBS והדגר על קרח למשך 20 דקות. לאחר תום זמן ההדגרה, שאב את תמיסת ה-dispa מבלי להפריע לרקמה. לאחר מכן, כסה את הרקמות לחלוטין ב-DMEM המכיל 1%BSA.כדי להפסיק את העיכול, העבירו את הרקמה לצלחת תרבית חדשה. לאחר מכן, בעבודה תחת מיקרוסקופ דיסקציה, החזיקו את הרקמה בעזרת מחט טונגסטן לא מחודדת ובעזרת מחט טונגסטן מחודדת.הפרידו את האקטודרמה על ידי קילופה מהרקמות האחרות. לאחר ההכנה, אחסנו את רקמת השתל ב-DMEM עם BSA על קרח עד שהמארח יהיה מוכן להשתלה. באמצעות השיטה שהודגמה קודם לכן, צרו חלון בביצת התרנגולת.הניחו את הביצה המכילה את העובר תחת מיקרוסקופ dissection באמצעות שני זוגות פינצטות. תפסו את קרום ה-IGN ואת השליה (amnion) וקרעו אותם בעדינות כדי ליצור חור ולחשוף את עובר המארח. סובבו את הראש על ידי הנחת זוג פינצטות על העין הימנית והפעלת לחץ תוך כדי החזקת הראש במצב יציב.השתמשו בפינצטה ובמחט כדי להסיר את הדרמיס של המארח לצורך קליטת השב transplanted. הוסיפו שני µL של neutral red לפיתרי עם השתבצים המוכנים. השתמשו בפיפטה מזכוכית כדי להעביר את השב transplanted למארח.מקם את הש Transplant במיקום להחלפת האקטודרמה שהוסרה. הכנס סיכת זכוכית בכל פינה של הרקמה המושתלת כדי לקבע את הש Transplant במקומו לאחר ההשתלה. סגור את החלון היטב באמצעות סרט דבק.החזירו את העובר לאינקובטור עד לשלב ההתפתחות הנדרש לניתוח; תמונה זו מציגה רקמה מ-URA של גוזל ברקדן שנצבעה עם נוגדן ספציפי לברקדן נגד Q-C-P-N-A. הרקמה המושתלה ממוקמת בין שני החיצים. אין עדות לצביעת QCPN ברקמה של עכבר בכימרת עכבר-ברקדן המוצגת כאן; שוב, הרקמה המושתלה ממוקמת בין שני החיצים ב-C; ב-2, היברידיזציה עם פרובה ספציפית לרצף החוזר B2.בבדיקת השחזור של גנים מסוג מחלקה אחת (class one genes) מתגלה כי הביטוי של sign B two מוגבל לאזור הכולל את השסתי המוצגת כאן כדמות של כימרה של אפרוח יונה, אשר נצבעה בצביעת טריכרום (trichrome). צביעת טריכרום צובעת קולגן ועצם בצבע כחול. שכפול של שלד הלסת העליונה נראה כפי שמצוין על ידי החץ. תמונה זו מציגה כימרה של אפרוח עכבר שנצבעה שוב בצביעת טריכרום.ניתן לראות שכפול של שלד הלסת העליונה. תמונה זו מראה היברידיזציה רדיואקטיבית במעקב אחר ביטוי נורמלי של BMP 7 במזנכימה של עובר אפרוח מושתל, כאשר הרקמה המוצגת כאן היא מרקמה של כימרה של עכבר ואפרוח. ניתן לראות כי ביטוי BMP 7 השרה במזנכימה הסמוכה להשתלה, כפי שמוצג על ידי החץ.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לבצע מניפולציות בעוברי אפרוח כדי להעריך מנגנונים המווסתים את התפתחות התהליכים המצחיים והנחריים.

assessing-signaling-properties-ectodermal-epithelia-during

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Mesenchyme הגולגולת עובר תנועות morphogenic דרמטיות שעשויים מספקת כוח מניע לגובה של הקפלים...

Assay Explant להערכת התנהגות ניידת של mesenchyme הגולגולת

ניתוח רקמות ספציפית של מודל התחדשות זקיקי שיער באמצעות lentivirus לתווך רווח או פסד--of-פונקציה.

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

פרוטוקול להפרדה של אקטודרם וmesenchyme פן עובר מתואר. אנו משתמשים Dispase השני לטיפול בעוברים שלמים ראשון, לנתח בליטות פן שלמות, ואז להפריד אקטודרם וmesenchyme הפנים.

הפרדת אקטודרם עכבר העוברי פן וmesenchyme

טכניקה להשתלה "אקסטרים Anterior דומיין" רקמות פנים בין Xenopus laevis עובר כבר מפותחת. רקמה ניתן להעביר מהרקע ביטוי גנים אחת לאחרת, ומאפשרת הלימוד של דרישות מקומיות לפיתוח craniofacial ולאיתות אינטראקציות בין אזורי פנים.

השתלת פנים ב<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; עוברים

פרוטוקול זה מתאר כיצד לנתח פסגת premigratory גולגולת עצבית (NC) מneurulas laevis Xenopus. יכול להיות מצופה explants אלה בפיברונקטין ותרבית במבחנה, או מורכב בחזרה לעוברי מארח. טכניקה זו מאפשרת חקר המנגנונים של מעבר NC האפיתל לmesenchyme, הגירה, ובידול.

Dissection של<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; העצבי קרסט עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; Explant תרבות או<em&gt; In vivo</em&gt; השתלות

confocal הדמיה זמן לשגות היא טכניקה רבת עוצמה שימושית לאפיון התפתחות עוברית. כאן, אנו מתארים את המתודולוגיה ולאפיין המורפוגנזה craniofacial בסוג פראי, כמו גם PDGFRA, smad5, וSMO עוברים שעברו מוטציה.

ניתוח Craniofacial המורפוגנזה בדג הזברה שימוש 4D מיקרוסקופיה confocal

מאמר זה מתאר שיטה ליצירת עוברי chimeric שנועדו לבחון את תרומתם מינים ספציפיים של רכס עצבי ו / או רקמות אחרות לפיתוח craniofacial.

הערכת תרומות מינים ספציפיות כדי Craniofacial פיתוח באמצעות מפלצות שליו-ברווז

מתוארים פרוטוקולים המשתמשים במחסומים אטומים לחסימת אירועי אינדוקציה בין רקמות ציר הגוף הראשי והצד בעובר הגוזל הנדרשים להיווצרות גפיים. חרוזים ספוגים באותות אינדוקטיביים מועמדים משמשים להתגברות על ההשפעה של מיקום מחסום וניתוח ביטוי גנים מאשר זאת.

יישום של חסמים בלתי חדירים בשילוב עם חרוזים ספוגים פקטור מועמד ללמוד איתותי אינדוקטיבי של צ&#39;יק

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט כדי לזהות ולכמת את רמות החלבון במהלך הגולגולת מורפולגנזה/פתוגנזה על ידי מכתים באמצעות העכבר ברקמות הגולגולת כמו דוגמאות. בנוסף, אנו מתארים שיטה להכנה והקפאה של רקמות קשות בלתי מתויטות מעכברים צעירים לצורך חיסוני.

הכנה לרקמה וכתמים של רקמות הגולגולת והעצמות הבלתי מתויטות

מאמר זה מתאר טכניקת השתלת רקמות שנועדה לבחון את תכונות האיתות והדפוס של המוח הקדמי הבסיסי במהלך התפתחות הגולגולת.

יצירת כימרות במוח הקדמי של העופות להערכת התפתחות הפנים

הפרוטוקול מציג שיטה לבידוד ליזאטים של חלבונים של תאים שלמים מתהליכי פנים של עוברי עכברים שנותחו או מתאי מזנכים עובריים של עכברים שעברו תרבית, וביצוע כתמים מערביים לאחר מכן כדי להעריך את רמות החלבון שעבר זרחן.

בידוד של חלבון של תאים שלמים ליסאטים מתהליכי פנים של עכברים ותאי מזנכיים פאלטליים בתרבית לניתוח פוספופרוטאין לניתוח פוספופרוטאין

חקור שיטת השתלת רקמה ליצירת עוברים כימריים לחקר תכונות האיתות של אקטודרם צפאלי בפיתוח קרניו-פאציאלי. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מולקולרי ומורפולוגי של תפקוד הרקמה.

הערכת נכסים איתות של Ectodermal epithelia במהלך פיתוח Craniofacial

גלה סרטונים נוספים