Name: Neuromodulation ותחבורה מיטוכונדריאלי: הדמיה חיה נוירונים בהיפוקמפוס פני משכי זמן ארוכים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: למדו הדמיה חיה של תחבורה מיטוכונדריאלית בנוירונים היפוקמפליים לאורך זמן. השיטה משתמשת בחלבון פלואורסצנטי מכוון למיטוכונדריה ובאינקובטור זול לתצפיות ארוכות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות דונלד האטסון לתרום המומחיות הטכנית שלו במיומנות רבה במהלך בעיצוב ייצור של השלב העליונה חממה. אנחנו גם מודים Ayda Dashtaei לקבלת סיוע טכני מעולה שלה. כל עבודה נתמך על ידי קרן המחקר Neurosciences.

<ol><li>Ligon, L. A., Steward, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Movement+of+mitochondria+in+the+axons+and+dendrites+of+cultured+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Movement of mitochondria in the axons and dendrites of cultured hippocampal neurons.</a> J Comp Neurol. 427, 340-350 (2000).</li>
<li>Miller, K. E., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+for+coherent+low+velocity+axonal+transport+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct evidence for coherent low velocity axonal transport of mitochondria.</a> J Cell Biol. 173, 373-381 (2006).</li>
<li>Macaskill, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miro1+is+a+calcium+sensor+for+glutamate+receptor-dependent+localization+of+mitochondria+at+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Miro1 is a calcium sensor for glutamate receptor-dependent localization of mitochondria at synapses.</a> Neuron. 61, 541-555 (2009).</li>
<li>Morris, R. L., Hollenbeck, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+transport+of+mitochondria+along+microtubules+and+F-actin+in+living+vertebrate+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Axonal transport of mitochondria along microtubules and F-actin in living vertebrate neurons.</a> J Cell Biol. 131, 1315-1326 (1995).</li>
<li>Rintoul, G. L., Filiano, A. J., Brocard, J. B., Kress, G. J., Reynolds, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+decreases+mitochondrial+size+and+movement+in+primary+forebrain+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamate decreases mitochondrial size and movement in primary forebrain neurons.</a> J Neurosci. 23, 7881-7888 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawley%2C+JN+%22Current+protocols+in+neuroscience%22">Current protocols in neuroscience</a>. , J. Wiley. (1999).</li>
<li>Fedoroff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFedoroff%2C+S+%22Protocols+for+neural+cell+culture%22">Protocols for neural cell culture</a>. , 3rd edn, Humana Press. (2001).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Crossin, K. L., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+stimulates+mitochondrial+transport+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Serotonin stimulates mitochondrial transport in hippocampal neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 36, 472-483 (2007).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+inhibits+mitochondrial+motility+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dopamine inhibits mitochondrial motility in hippocampal neurons.</a> PLoS One. 3, e2804-e2804 (2008).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Makarenkova, H., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDAC6+regulates+mitochondrial+transport+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">HDAC6 regulates mitochondrial transport in hippocampal neurons.</a> PLoS One. , e10848-e10848 (2010).</li>
<li>Curran, M. A., Kaiser, S. M., Achacoso, P. L., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transduction+of+nondividing+cells+by+optimized+feline+immunodeficiency+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Efficient transduction of nondividing cells by optimized feline immunodeficiency virus vectors.</a> Mol Ther. 1, 31-38 (2000).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

העסקת lentivirus בתיווך הביטוי של חלבון פלואורסצנטי ממוקד המיטוכונדריה בנוירונים בתרבית נגוע באינקובטור זול מעבדה בנוי הבמה העליון המאפשר הדמיה של תאים חיים על משכי זמן ממושך, הצלחנו לחקור את הקשר בין התנועה המיטוכונדריה אותות neuromodulatory , כגון סרוטונין (5-HT), דופמין (DA), ו אצטילכולין (ACH). המחקרים שלנו סייעו להבהיר מסלול איתות זה, בפעם הראשונה, קישורים סחר המיטוכונדריה לשינויים בפעילות של נוירונים, מווסתת על ידי נוירוטרנסמיטרים כגון 5-HT ו התובע - כי הם בלב של תפקוד עצבי. אנו מוצאים כי השימוש חלבוני ניאון ממוקד מאפשר תצפית של המיטוכונדריה שכותרתו לחיות נוירונים בתרבית לאורך תקופות ממושכות שעשויים להיות רלוונטיים יותר פיזיולוגית מאשר משכי זמן קצר הרבה יותר, כי הם אפשריים באמצעות צבעים חיוניים. יתר על כן, את עוצמת האות חלבון פלואורסצנטי מאפשר לנו לשמור על חשיפה קצרה פעמים במהלך רכישת התמונה, צמצום האפשרות של photobleaching או phototoxicity. לבסוף, בשלב העליונה פשוט וזול אינקובטור השומר על טמפרטורה ולחות הסביבה, ו-CO 2 רמות, תוך מזעור אידוי של התקשורת, מאפשרת לנו לעקוב אחר תנועת המיטוכונדריה נוירונים חיים במשך שעות ואפילו ימים. חוקרים המעוניינים לייצר שלב העליונה חממה לטווח ארוך תצפיות של המיטוכונדריה בנוירונים לחיות לא צריך לעקוב אחר פרטים מדויקים של העיצוב שלנו, ובלבד המאפיינים של החומרים המשמשים (למשל, קרום חדיר גז כדי למנוע אידוי של התקשורת ) וכן להחיל עקרונות (למשל, בקרת טמפרטורה ולחות, חציצה של תחזוקה pH, של osmolarity) הם בדרך כלל בקנה אחד עם מה שמתואר בפרוטוקול זה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> כמות </th><th> תיאור (ואת מיקום באיור 1) </th></tr><tr><td> 1 </td><td> רקמות תרבות חממה (H) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> מחממים עמידים פלסטיק המתחם (delrin או דומה) (א) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> מסגרת פלסטיק המכסה GBM 35mm (עבור הדבקת קרום על צלחת פטרי) (M) </td></tr><tr><td> 1-2 </td><td> מטר ליניארי נקה PFTE (טפלון) קרום חומר </td></tr><tr><td> 4 </td><td> האגודל פליז ברגים </td></tr><tr><td> 2 </td><td> גוף קירור קטן נגדים 10kOhm (משמש גופי חימום בתוך המתחם חממה הבמה למעלה) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> שנאי (אספקת הנוכחית 9V כדי נגדים) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> חממה בקר טמפרטורה בדיקה (ויסות התרמוסטט של הכוח נגדים קירור באמצעות שנאי) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2000ml בקבוק Erlenmeyer (צעיף לדיכוי רטט צינור לפני שלב העליונה חממה) (K) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 1 / 8 &quot;גיליון sorbothane (חומר אטם הבסיס של שלב העליונה חממה) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> אטום ABS (או מקביל) קופסת פלסטיק (דיור עבור משאבת אקווריום) (J) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> משאבת אקווריום (אני) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> מחשב קטן מאוורר הקירור </td></tr><tr><td> 1 </td><td> מארז פלסטיק מאוורר (L) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> שנאי 9V עבור מאוורר המחשב </td></tr><tr><td> 20-30ft </td><td> צינור Nalgene או סיליקון (הקשרים בין תרבות רקמות העליונה שלב חממות, מלכודות לחות) (F, G, N) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> והברזים למיניהם פלסטיק (לפתוח ולסגור את זרימת האוויר לפני ואחרי שלב העליונה חממה) (O) </td></tr><tr><td> 4 </td><td> דוקרני פליז מחברים צינור (צינור לחיבורים מ / אל הבמה העליונה החממה המתחם אקווריום משאבה) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> פליז מצמדים מהיר (עבור חיבורים צינור מ / אל הבמה העליונה חממה) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> פליז מצמדים מהיר (עבור חיבורים צינור מ / אל הבמה העליונה חממה) </td></tr></tbody></table> טבלה 1. שלב העליונה חממה חלקים: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> Poly-D-ליזין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> P7280-5mg </td></tr><tr><td> laminin </td><td> רוש ומדע יישומי </td><td> 11243217001 </td></tr><tr><td> 35 מ&quot;מ זכוכית התחתונה מנות </td><td> MatTek </td><td> P35GC-0-14-C </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> החיים טכנולוגיות </td><td> 10567 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> החיים טכנולוגיות </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> החיים טכנולוגיות </td><td> 35050 </td></tr><tr><td> ליפידים עתירי BSA </td><td> החיים טכנולוגיות </td><td> 11020-021 </td></tr><tr><td> L-Asparagine </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> P0380-100 גרם </td></tr><tr><td> L-פרולין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> A8381-100 גרם </td></tr><tr><td> ויטמין B-12 </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> V2876-100mg </td></tr><tr><td> 5-HT </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> H9523-25mg </td></tr><tr><td> 8-OH-DPAT </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> H8520-25mg </td></tr><tr><td> דופמין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> H8502-5G </td></tr><tr><td> ברומוקריפטין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> B2134-25mg </td></tr><tr><td> SKF38393 </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> D047-100 מ&quot;ג </td></tr></tbody></table>

neuromodulation ותחבורה מיטוכונדריאלי: הדמיה חיה נוירונים בהיפוקמפוס פני משכי זמן ארוכים

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

כדי להבין את הקשר בין תחבורה המיטוכונדריה ותפקוד עצבי, חיוני לבחון התנהגות המיטוכונדריה בנוירונים בתרבית לחיות המשכים המורחבת 1-3. עכשיו זה אפשרי באמצעות צבעים חיוניים חלבוני ניאון עם אילו רכיבים cytoskeletal, האברונים, ומבנים אחרים בתאים חיים יכול להיות מתויג, ואז דמיינו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי דינמי. כך למשל, הנוירונים עוף עובריים אוהד, תנועה המיטוכונדריה התאפיינה באמצעות rhodamine חיוני לצבוע 123 4. במחקר אחר, המיטוכונדריה היו דמיינו בנוירונים forebrain עכברוש ידי transfection של eYFP ממוקד mitochondrially 5. עם זאת, הדמיה של נוירונים העיקרי על דקות, שעות, ימים או אפילו מציג מספר סוגיות. הבולטים הללו הם: 1) קיום התנאים תרבות כגון טמפרטורה, לחות pH במהלך הפגישות הדמיה רב; 2) איתות חזק, יציב ניאון כדי להבטיח הן את איכות התמונות רכשה מדידה מדויקת של עוצמת האות במהלך ניתוח התמונה; ו 3) להגביל את החשיפה פעמים במהלך הרכישה התמונה כדי למזער photobleaching ולהימנע phototoxicity. כאן אנו מתארים פרוטוקול המאפשר תצפית, ויזואליזציה, וניתוח של התנועה המיטוכונדריה נוירונים בהיפוקמפוס תרבותי עם רזולוציה גבוהה הזמני בתנאים אופטימליים תמיכה החיים. בנינו סביר בשלב העליונה חממה המספק ויסות טמפרטורה טובה זרימת הגז באטמוספירה, וגם מגביל את מידת התאדות התקשורת, והבטיח pH osmolarity יציבה. בחממה זו קשורה, דרך כניסת וצינורות לשקע, לתרבות תקן רקמות החממה, אשר מספק רמות לחות קבוע אווירה של 5-10% CO 2 / אוויר. עיצוב זה מציע חלופה חסכונית חממות מיקרוסקופ באופן משמעותי יותר יקר, כי לא בהכרח להבטיח את יכולת הקיום של תאים על פני שעות רבות ואפילו ימים. כדי להמחיש את המיטוכונדריה, אנו להדביק תאים עם lentivirus קידוד חלבון פלואורסצנטי אדום כי הוא ממוקד mitochondrion. זה מבטיח איתות חזק ומתמשך, אשר, יחד עם שימוש של מקור אור קסנון יציב, מאפשר לנו להגביל את החשיפה פעמים במהלך הרכישה תמונה וכל אלא מונע photobleaching ו phototoxicity. שתי יציאות הזרקה על החלק העליון של השלב העליון, החממה לאפשר לממשל חריפה של נוירוטרנסמיטורים ריאגנטים אחרים שנועדו לווסת את תנועת המיטוכונדריה. בביטוי, lentivirus בתיווך סכום של חלבון אברון במיקוד ניאון אדום שילוב של חממה הבמה העליון שלנו, מיקרוסקופ פלואורסצנטי קונבנציונאלי הפוכה, מצלמת CCD, ומקור אור קסנון לאפשר לנו לרכוש זמן לשגות תמונות של תחבורה המיטוכונדריה נוירונים חיים על פני משכי זמן ארוכים מאלה אפשרי במחקרים פריסת צבעים חיוניים קונבנציונאלי-off-המדף מערכות תומכות חיים.

אנו מתארים פרוטוקול המאפשר הדמיה של המיטוכונדריה לחיות הנוירונים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי פני משכי זמן ארוכים. הדמיה על תקופות ממושכות נעשה באמצעות הביטוי lentivirus בתיווך של חלבון פלואורסצנטי ממוקד mitochondrially ושימוש זול הבמה העליון חממה כי תוכנן ונבנה במעבדה שלנו.

Neuromodulation ותחבורה מיטוכונדריאלי: הדמיה חיה נוירונים בהיפוקמפוס פני משכי זמן ארוכים

כדי להבין את הקשר בין הובלה מיטוכונדריאלית לבין תפקוד עצבי, חיוני לבחון את התנהגות המיטוכונדריה בתרביות חיות של...

המטרה הכללית של הליך זה היא להדמות את הובלת המיטוכונדריה בנוירונים בתרבית לאורך פרקי זמן ממושכים באמצעות מיקרוסקופיית פלואורסצנציה של תאים חיים. דבר זה מושג תחילה על ידי סימון המיטוכונדריה בנוירונים בתרבית באמצעות חלבון פלואורסצנטי המכוון לאברון. השלב השני של ההליך הוא רכישת תמונות של הובלת המיטוכונדריה תחת תנאי בקרה.השלב השלישי של הפרוצדורה הוא רכישת סדרות תמונות במשרה של זמן (time-lapse) של הובלה מיטוכונדריאלית לאחר מתן אקוטי של נוירומודולטורים כגון סרוטונין. השלב האחרון של הפרוצדורה הוא ביצוע ניתוח של סדרות תמונות ה-time-lapse שנרכשו. לבסוף, ניתן להשיג תוצאות המראות כי מוליכים עצביים מווסתים את ההובלה המיטוכונדריאלית.תוצאות כאלה מושגות רק על ידי הדמיה של מיטוכונדריה המסומנות פלורוצנטית בנוירונים לאורך פרקי זמן ממושכים. היתרון המרכזי של שיטה זו על פני טכניקות קיימות, כגון סימון בצבע חי (vital dye) או טרנספקציה זמנית של GFP, הוא ששיטה זו מאפשרת ביצוע של תצפיות ארוכות טווח על הובלה מיטוכונדריאלית בנוירונים בריאים בתרבית. את ההליך זה תדגים Chen, עמיתה מחוקרת מהמעבדה שלי, על מנת לספק סביבה מחוממת ומלחחת באופן יציב.האינקובטור המותקן מעל הבמה מחובר לאינקובטור סטנדרטי לתרביות רקמה באמצעות מעגל סגור; מכסה ממברנת A-P-F-T-E עבור צלחות תרבית מזכוכית בעלת תחתית בקוטר 35 מילימטר מאפשר חילוף גזים בין תרבית הנוירונים לבין הסביבה בתוך האינקובטור. יחד, תכונות אלו ואחרות מאפשרות תצפית ארוכת טווח בנוירונים בתרבית תחת תנאים ניסיוניים שונים. העבר את צלחת התרבית המכילה נוירונים מההיפוקמפוס, המבטאים את חלבון ה-mito turbo red, למנדף לתרביות רקמה.החליפו את המכסה הפלסטי במכסה ממברנת PFTE והעבירו את צלחת התרבית למיקרוסקופ. הצמידו את בסיס האינקובטור למסבך המיקרוסקופ, ולאחר מכן מקמו בזהירות את צלחת התרבית המכוסה בממברנה. בפתח השקוע, יישרו את תא האינקובטור עם מוטות הפלדה בבסיס האינקובטור והורידו את התא אל הבסיס.הדקו את הברגי הלשונית עד להשגת איטום טוב בין המארז לבסיס. הפעילו את בקר גלגל המסננים של המיקרוסקופ, את מקור האור ואת מצלמת ה-CCD לפני פתיחת תוכנת הדימות. בפרוטוקול זה, שקופית מספר חמש משמשת לרכישת תמונות.עברו לעדשה עם הגדלה של 63x בשמן (oil immersion) והורידו את התושבת של העדשות. מרחו בזהירות שמן טבילה על פני השטח של העדשה. לחצו על סמל חלון הפוקוס בסרגל הכלים והדליקו את מנורת השדה הבהיר (brightfield) על ידי הזזת התקיד של המנורה.כדי לכוון את עוצמת התאורה, השג פוקוס על שדה של תאים באמצעות העדשות העוקביות ואתר תא רלוונטי. בחר את המסנן XI three תחת לשונית המיקרוסקופ, אתר את מישור הפוקוס עבור המיטוכונדריה בתאים שסומנו עם חלבון mito turbo red, ולאחר מכן עבור למצלמת ה-CCD. לחץ על סמל לכידת התמונה בסרגל הכלים, החל מזמן חשיפה ראשוני של 100 milliseconds.מצאו את החשיפה האופטימלית באמצעות כפתורי ה-test ו-find best בחלון הלכידה (capture window). בתיבת סוג הלכידה (capture type), סמנו את אפשרות ה-time-lapse ובחרו את מרווח ההדמיה הרצוי ואת משך סשן ההדמיה תחת אפשרויות הלכידה של ה-time-lapse.התחילו ברכישת תמונות בשיטת time-lapse על ידי לחיצה על כפתור ההפעלה (start) בפינה הימנית התחתונה של חלון הלכידה. לאחר לכידת סשן דימוי ביקורתי, הגשה של מוליכים עצביים או ריאגנטים אחרים דרך פתחי ההזרקה בחלקו העליון של האינקובטור שעל המבמה. עם הוספת האגוניסט לקולטן סרוטונין 8-OH-DPAT, מיטוכונדריה שעד כה הייתה סטטית (מסומנת בחץ) נעה לאורך האקסון של נוירון מההיפוקמפוס.המהירות הממוצעת והכיווניות של מיטוכונדריה בודדות מסוכמות לפני הוספת סרוטונין. מרבית המיטוכונדריה הן סטטיות, עם זאת, לאחר הוספת סרוטונין, 42% מהמיטוכונדריה מראות כעת תנועה כיוונית ועוברות מרחקים גדולים יותר מאלו המראות תנועה כיוונית בהיעדר סרוטונין. לעומת זאת, עם הוספת דופמין, 92% מהמיטוכונדריה הן סטטיות ב-15 הדקות האחרונות של סשן הדמיה בעקבות הליך זה.ניתן לבצע שיטות אחרות לניטור של יותר מאות של סיגנל אחד כדי לענות על שאלות נוספות. לדוגמה, כיצד קיימת קשר בין פעילות סידן לבין הובלה מיטוכונדריאלית בנוירונים.

neuromodulation-mitochondrial-transport-live-imaging-hippocampal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הדמיה תא חי היא של כלי מסוים כאשר לומדים את הדינמיקה של סחר אברון. כאן אנו מתארים פרוטוקול הדמיה חיה של צפופה ליבות שלפוחית ​​בנוירונים בתרבית שימוש רחב בתחום מיקרוסקופ פלואורסצנטי. פרוטוקול זה הוא גמיש ניתן להתאים האברונים תמונה אחרים כגון המיטוכונדריה, endosomes, ואת peroxisomes.

הדמיה חיה של צפופה ליבות שלפוחית ​​בתוך ראשי נוירונים בהיפוקמפוס Cultured

מקור: }Ulivi, A. F., et. al. הדמיה אורכית דו-פוטונית של ההיפוקמפוס הגבי CA1 בעכברים חיים. J. Vis. exp. (2019)} }סרטון זה מדגים הדמיה אורכית של שני פוטונים של נוירונים פירמידליים בעלי תווית פלואורסצנטית בעכבר חי,  הצגת ההכנה, יישור הצינורית וההדמיה של דנדריטים ועמוד שדרה דנדריטי כדי לחקור את המבנה העצבי באזור CA1 בהיפוקמפוס.

הדמיה אורכית דו-פוטונית של נוירונים המסומנים פלואורסצנטית בהיפוקמפוס של עכבר חי 

מקור: Katsalifis, A., et al. הדמיה חיה של מצב חמצון חיזור גלוטתיון מיטוכונדריאלי בנוירונים ראשוניים באמצעות אינדיקטור רציומטרי. J. Vis. Exp. (2021)סרטון זה מדגים את ההדמיה של מצב חמצון חיזור מיטוכונדריאלי בתאי עצב ראשוניים באמצעות מחוון פלואורסצנטי רציומטרי. על ידי החלת שני אורכי גל עירור תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, נמדד יחס עוצמת הקרינה כדי להעריך חמצון מיטוכונדריאלי. הפרוטוקול כולל גירוי N-methyl-D-aspartate (NMDA) כדי לגרום לזרם סידן וייצור מיני חמצן תגובתיים (ROS), ולאחר מכן כיול באמצעות...

הדמיית מצב חמצון חיזור מיטוכונדריאלי בתאי עצב ראשוניים באמצעות אינדיקטור רציומטרי

עיצוב מחדש של Ca2+ תוך תאי בהזדקנות עשוי לתרום לאקסיטוטוקסיות ולנזק לנוירונים, תהליכים המתווכים על ידי עומס יתר של Ca2+. מטרתנו הייתה לחקור שיפוץ Ca2+ במוח המזדקן באמצעות הדמיה פלואורסצנטית וביו-לומינסנציה של Ca2+ ציטוזולי ומיטוכונדריאלי בתרביות ארוכות טווח של נוירונים בהיפוקמפוס של חולדות, מודל של הזדקנות עצבית.

הקרינה ופליטת אור הדמיה של Ca subcellular<sup&gt; 2 +</sup&gt; בבני נוירונים בהיפוקמפוס

שיטה זו מתארת הכנה כרונית המאפשרת גישה אופטית להיפוקמפוס של עכברים חיים. הכנה זו יכולה לשמש לביצוע הדמיה אופטית לאורך של הפלסטיות הקונסטרוקטיבית העצבית ופעילות-מעורר פלסטיות הסלולר במשך תקופה של מספר שבועות.

אורך שני-פוטון הדמיה של CA1 היפוקמאל בעכברים חיים

הובלה מיטוכונדריאלי לקויה ומורפולוגיה מעורבים במחלות ניווניות שונות. הפרוטוקול המוצג משתמש מושרה המושרה תא גזע הנגזרת הנוירונים המוח כדי להעריך הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה ב מפרסטית תורשתית. פרוטוקול זה מאפשר אפיון של סחר מיטוכונדריאלי לאורך אקסונים וניתוח של מורפולוגיה שלהם, אשר להקל על המחקר של מחלות ניווניות.

ניתוח הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה בתאי גזע בעלי השפעה של האדם המושרה בנוירונים

מאמר זה מדגים את הכנת חלון הדמיה בהתאמה אישית בתוספת קנולה עירוי והשתלתו על אזור CA1 של ההיפוקמפוס בעכברים.

הליך גולגולתי להדמיית פעילויות עצביות בהיפוקמפוס של עכברים מתנהגים

מאמר זה מתאר פרוטוקול כדי לקבוע הבדלים במצב redox בזאלי ו redox תגובות perturbations חריפה בהיפוקמפוס ראשוני נוירונים קליפת המוח באמצעות מיקרוסקופיה חיה קונפוצלית. ניתן להחיל את הפרוטוקול על סוגי תאים ומיקרוסקופים אחרים עם שינויים מינימליים.

הדמיה חיה של מצב גלוטתיון גלוטתיון מיטוכונדריאלי בנוירונים ראשוניים באמצעות מחוון רצומטרי

מאמר זה מתאר שיטה לתצפית כרונית in vivo של תאי מיקרוגליה במנוחה בהיפוקמפוס עכבר CA1 באמצעות ניתוח מבוקר מדויק ומיקרוסקופ שני פוטונים.

ב Vivo הדמיה כרונית של שני פוטונים של תאי מיקרוגליה בהיפוקמפוס העכבר

השיטות הנוכחיות מתארות גישה לא רציומטרית להדמיית סידן ברזולוציה גבוהה, תת-מדורית in vivo ב- Caenorhabditis elegans באמצעות מדדי סידן מקודדים גנטית זמינים.

הדמיה תת-תאית של טיפול בסידן עצבי ב-Vivo

כאן, אנו מדגימים כיצד לשלב טרנספקציה של נוירונים מכרסמים ראשוניים בהיפוקמפוס עם הדמיה קונפוקלית של תאים חיים כדי לנתח השפעות פתולוגיות המושרות על ידי חלבונים על הובלה אקסונלית ולזהות מסלולים מכניסטיים המתווכים השפעות אלה.

שימוש בדימות תאים חיים כדי למדוד את ההשפעות של חלבונים פתולוגיים על תחבורה אקסונלית בנוירונים ראשוניים בהיפוקמפוס

למדו הדמיה חיה של תחבורה מיטוכונדריאלית בנוירונים היפוקמפליים לאורך זמן. השיטה משתמשת בחלבון פלואורסצנטי מכוון למיטוכונדריה ובאינקובטור זול לתצפיות ארוכות.

Neuromodulation ותחבורה מיטוכונדריאלי: הדמיה חיה נוירונים בהיפוקמפוס פני משכי זמן ארוכים

גלה סרטונים נוספים