ספירת אדם בתאי גזע עצביים

עכשיו אני הולך להראות לכם איך לספור תאי קודמן עצביים אנושיים ואתם תספרו את התאים שלכם כשתרצו לשים אותם לכימיה חיסונית או כשתרצו לבצע טרנספקציה עם מכונת גורם גרעיני. אני משתמש בציטומטר המו ניגודיות פאזה שיש לו רשת קצה וגם אנחנו משתמשים בצבע שנקרא טריפ וכחול. והצבע שימושי בכך שהוא יכול להבדיל בין תאים חיים ומתים.

תאים מתים או גוססים לוקחים את הצבע הזה והם נראים כחולים. כאשר אתה מסתכל על התאים בהמו, ציטומטר ותאים חיים מסוגלים להוציא את הצבע הזה והם, הם, הם לא נראים כחולים. כך שתוכל לקבוע את הכדאיות של התאים שלך להכין תמיסה של טריפ וכחול ומדיה.

אני הולך להוסיף 20 מיקרוליטר של מלכודת ותמיסה כחולה לתוך צינור ה-epi הזה של 0.5 מיל. ואז אני הולך להוסיף 25 מיקרוליטר של מדיה. אז ככה כרגע יש לי 45 מיקרוליטר של, של מחבת מלכודת כחולה ותמיסת מדיה כך שכאשר אני מוסיף חמישה מיקרוליטר של תרחיף תאים, אני הולך לקבל דילול של 1 עד 10.

אז עכשיו אני הולך להוסיף חמישה מיקרוליטרים של תרחיף תאים. ראשית אני הולך לוודא שהתאים מושעים היטב על ידי מערבולת אצבעות. אז עכשיו אני רוצה לוודא שהפתרון הזה מעורבב היטב.

אז אני הולך להעלות ולהוריד את המיטה כמה פעמים. ולבסוף אני הולך להעמיס בערך 12 מיקרוליטר של תרחיף התאים הזה לתוך ציטומטר המו. יש לו, יש לו שתי יציאות ואתה יכול, אתה יכול להשתמש בכל אחת מהן.

אז כל מה שאתה צריך לעשות הוא להציג את התמיסה בנמל הזה והנוזל הולך להישאב על ידי פעולה נימית. ועכשיו אני מוכן לספור. הנה מבט על ציטומטר ההמו ב-10 x וכאן יש לנו רבע המכיל 16 ריבועים.

וכפי שאתם יכולים לראות, אנו יכולים לראות כאן תאים חיים ומתים. כאן יש לנו תאים חיים כמו זה וזה וזה. ויש לנו גם כמה תאים מתים כמו זה.

אם תשימו לב, התא המת נראה כחול כהה, בעוד שלתאים חיים יש מעין ברד סביבם. אז עכשיו אני הולך לספור את כל התאים החיים. אז אני הולך לעבור משמאל לימין ומלמעלה למטה.

1, 2, 3, 4, 5, 6, 33, 1 32, 33, 34, 3 5, 3 6. אז יש לנו שלושה שישה תאים בסך הכל ברביע הזה. לכן, כאשר אני רואה תאים שנמצאים על קו הגבול של הרביע, כגון לאורך הקו הזה ממש כאן, כדי להיות עקביים, אני סופר תאים שנמצאים בגבול השמאלי ובגבול העליון.

ואני סופר באופן עקבי תאים על הגבולות האלה עבור כל הרבעים בציטומטר ההמו. אז עכשיו אנחנו הולכים לחשב כמה תאים יש לנו למיקרוליטר. וכדי לעשות זאת אני הולך לקחת את ממוצע התאים לרבע, שהוא 38 ולהכפיל ב-10, שהוא גורם שנקבע על ידי מידות החדר.

ואנחנו גם הולכים להכפיל ב-10, שזה גורם הדילול שלנו במקרה הזה. ובסופו של דבר, נקבל את מספר התאים למיקרוליטר. אז במקרה הזה יש לנו 3,800 תאים למיקרוליטר.

ומכיוון שאנו מחדשים את משטח התאים שלנו בתמיסה של 500 מיקרוליטר, אתה יכול לחשב כמה תאים בסך הכל יש לך. וכולנו מוכנים.